动物模型构建与药物干预
建立PS-MPs暴露小鼠模型,并验证E4A对认知行为的影响。
C57BL/6小鼠随机分为四组,通过灌胃给予PS-MPs(50 mg/kg,每两天一次,共4周)建立暴露模型,并通过腹腔注射E4A(400 ng/kg,每天一次,后两周)进行干预。
Targeted activation of ErbB4 receptor ameliorates neuronal deficits and neuroinflammation in a food-borne polystyrene microplastic exposed mouse model
包含动物模型(小鼠)、体外细胞模型(HT22、BV2)、多种行为学检测、组织学、免疫荧光、Western blot、透射电镜及生化检测,并明确进行功能验证和机制研究。
6月龄雄性C57BL/6小鼠 HT22小鼠海马神经元细胞系 BV2小鼠小胶质细胞系
PS-MPs给药剂量:50 mg/kg,每两天一次,灌胃给药,持续4周 E4A给药剂量:400 ng/kg,每天一次,腹腔注射,给药2周 PS-MPs平均直径:约2 μm HT22细胞处理:PS-MPs浓度100 µg/mL处理24小时,E4A浓度10 nM再处理24小时 动物分组:对照组、E4A组、PS-MPs组、PS-MPs+E4A组,每组8只
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立PS-MPs暴露小鼠模型,并验证E4A对认知行为的影响。
C57BL/6小鼠随机分为四组,通过灌胃给予PS-MPs(50 mg/kg,每两天一次,共4周)建立暴露模型,并通过腹腔注射E4A(400 ng/kg,每天一次,后两周)进行干预。
评估PS-MPs暴露对小鼠认知、学习和记忆功能的影响以及E4A的改善作用。
依次进行旷场实验、新物体识别实验、Y迷宫实验和水迷宫实验,记录相关行为参数。
观察PS-MPs对海马神经元树突棘、突触和线粒体形态的影响以及E4A的保护作用。
采用Golgi染色分析树突棘密度,透射电镜观察突触和线粒体超微结构。
检测PS-MPs暴露对ErbB4信号通路、突触蛋白、线粒体蛋白和炎症通路蛋白表达的影响,以及E4A的调节作用。
通过Western blot和免疫荧光检测海马组织和细胞中相关蛋白的表达和磷酸化水平。
在HT22海马神经元和BV2小胶质细胞中验证E4A对PS-MPs损伤的作用及机制。
HT22细胞经PS-MPs损伤后,用E4A处理,检测细胞活力、氧化应激、ATP水平、相关蛋白表达;并收集处理后的神经元上清,处理BV2细胞,检测炎症通路相关蛋白表达。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验 | C57BL/6小鼠 | Changzhou Cavens Laboratory Animal Co., Ltd. | -- |
| 细胞培养 | HT22小鼠海马神经元细胞系 | Procell Life Science & Technology Co., Ltd. | CL-0493A |
| BV2小鼠小胶质细胞系 | Procell Life Science & Technology Co., Ltd. | CL-0697 | |
| 药物处理 | 4-溴-1-羟基-2-萘甲酸(E4A) | -- | C11H7BrO3 |
| Golgi染色 | FD Rapid GolgiStain™试剂盒 | Saint-Bio | BA1808 |
| 免疫荧光染色 | Tissue Tek O.C.T.包埋剂 | Sakura Finetek | 4583 |
| 抗β3-微管蛋白抗体 | Santa Cruz Biotechnology | sc80016 | |
| 抗p-ErbB4抗体 | Bioss | bs-3220R | |
| 抗突触素(SYP)抗体 | Beyotime | AF8091 | |
| 抗IBA1抗体 | Bioss | bs-1363R | |
| 抗GFAP抗体 | Boster | BA0056 | |
| Alexa Fluor 488偶联的山羊抗小鼠IgG | Boster | BA1126 | |
| Alexa Fluor 594偶联的山羊抗兔IgG | Boster | BA1142 | |
| 含DAPI的抗淬灭封片液 | Beyotime | P0131 | |
| 荧光显微镜 | Carl Zeiss AG | Axio Imager Z2 | |
| Western blot | SDS-PAGE凝胶 | ACE | F15412MGel |
| PVDF膜 | Merck Millipore Ltd | FFP39 | |
| HRP标记的二抗 | Beyotime | A0192, A0208 | |
| 增强化学发光检测系统 | Peiqing | JS-M6P | |
| 透射电镜 | 透射电子显微镜 | Hitachi | HT7700 |
| 氧化应激检测 | BCA蛋白定量试剂盒 | BOYI | BK0001-01 |
| T-SOD检测试剂盒 | Jiancheng | A001-1-2 | |
| GSH检测试剂盒 | Jiancheng | A006-2-1 | |
| GSH-Px检测试剂盒 | Jiancheng | A005-1-2 | |
| MDA检测试剂盒 | Jiancheng | A003-1-2 | |
| 酶标仪 | Bio-Tek | Synergy H4 | |
| ATP检测 | ATP检测试剂盒 | Jiancheng | A095-1-2 |
| 细胞免疫荧光 | 抗PSD95抗体 | Servicebio | GB11277-100 |
| 抗IBA1抗体 | Servicebio | GB15105-100 | |
| 抗p-NF-κB抗体 | Servicebio | GB113882-100 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立 | 小鼠品系、性别、年龄、数量、分组方式、PS-MPs剂量、给药途径、频率、持续时间、E4A剂量、给药途径、频率、持续时间 阅读提示:见Materials and methods - Animals and drug administration |
| 行为学检测 | 各行为学实验的流程参数(旷场时间、NOR熟悉和测试时间、Y迷宫探索时间间隔、水迷宫训练天数、探查试验时间等) 阅读提示:见Materials and methods - Behavioral assays |
| 突触和线粒体结构分析 | Golgi染色试剂盒品牌和货号、切片厚度、分析区域、TEM样本制备方法、切片厚度、成像参数、定量分析方法 阅读提示:见Materials and methods - Golgi staining and analysis 和 Transmission electron microscopy (TEM) analysis |
| 分子表达检测 | 蛋白提取方法、SDS-PAGE凝胶浓度、转膜条件、封闭液和浓度、一抗稀释比例和来源、二抗稀释比例、ECL检测系统、定量软件 阅读提示:见Materials and methods - Western blot analysis |
| 体外细胞实验 | HT22和BV2细胞培养条件、PS-MPs处理浓度和时间、E4A处理浓度和时间、上清收集时间、氧化应激和ATP检测方法 阅读提示:见Materials and methods - Cell processing, C11H7BrO3 treatment of a hippocampal neuron cell damage model induced by PS-MPs, Evaluation of oxidative stress in hippocampal neurons in vitro, Quantification of adenosine triphosphate (ATP) levels in cultured hippocampal neurons |