PCOS小鼠模型建立与分组处理
建立PCOS小鼠模型,评估甘草酸的治疗效果。
25日龄雌性C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照组、PCOS组、PCOS+甘草酸组、PCOS+溶剂组。PCOS组皮下注射DHEA并喂高脂饮食,甘草酸组每日腹腔注射100 mg/kg甘草酸。
Glycyrrhizin ameliorates impaired glucose metabolism and ovarian dysfunction in a polycystic ovary syndrome mouse model
包含PCOS小鼠模型体内实验、KGN细胞体外实验,以及HMGB1过表达和敲低实验,功能验证和机制验证明确。
PCOS小鼠模型(DHEA+高脂饮食诱导) KGN人颗粒细胞样肿瘤细胞系
DHEA剂量:6 mg/100 g皮下注射 高脂饮食(60% kcal脂肪) 甘草酸给药剂量:100 mg/kg,腹腔注射,每日一次 KGN细胞HMGB1过表达或敲低后,检测TLR9、MyD88、NF-κB及GLUT4、p-AKT等蛋白和mRNA表达
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
建立PCOS小鼠模型,评估甘草酸的治疗效果。
25日龄雌性C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照组、PCOS组、PCOS+甘草酸组、PCOS+溶剂组。PCOS组皮下注射DHEA并喂高脂饮食,甘草酸组每日腹腔注射100 mg/kg甘草酸。
评估甘草酸对PCOS小鼠糖脂代谢的影响。
检测体重、BMI、空腹血糖、空腹胰岛素、HOMA-IR、HOMA-β,进行口服葡萄糖耐量试验和胰岛素耐量试验,并测定血清血脂水平。
评估甘草酸对PCOS小鼠卵巢形态和内分泌功能的影响。
通过阴道涂片判断动情周期,卵巢组织H&E染色进行卵泡计数,ELISA检测血清睾酮、LH、FSH水平。
验证甘草酸对HMGB1及其相关信号通路的影响。
检测小鼠卵巢和KGN细胞中HMGB1、TLR9、MyD88、NF-κB、GLUT4、p-AKT等蛋白和mRNA表达;在KGN细胞中进行HMGB1过表达和敲低实验。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 动物实验-溶剂 | 芝麻油 | Acros Organics | 241002500 |
| 动物实验-模型诱导 | 脱氢表雄酮 | EMD Millipore | 252805 |
| 动物实验-溶剂 | 二甲亚砜 | Sigma-Aldrich | D2650-100ML |
| 动物实验-治疗 | 甘草酸 | Sigma-Aldrich | 53956-04-0 |
| 代谢检测-血糖 | ACCU-CHEK血糖仪 | Roche | -- |
| 代谢检测-胰岛素 | 小鼠胰岛素ELISA试剂盒 | J&L Biological | JL11459 |
| 激素检测 | 睾酮ELISA试剂盒 | J&L Biological | JL25196 |
| 促黄体生成素ELISA试剂盒 | J&L Biological | JL10432 | |
| 促卵泡激素ELISA试剂盒 | J&L Biological | JL10239 | |
| 血脂检测 | 高密度脂蛋白胆固醇比色法试剂盒 | Nanjing Jian Cheng Bioengineering Institute | A112-1-1 |
| 低密度脂蛋白胆固醇比色法试剂盒 | Nanjing Jian Cheng Bioengineering Institute | A113-1-1 | |
| 总胆固醇比色法试剂盒 | Nanjing Jian Cheng Bioengineering Institute | A111-1-1 | |
| 甘油三酯比色法试剂盒 | Nanjing Jian Cheng Bioengineering Institute | A110-1-1 | |
| ELISA | HMGB1 ELISA试剂盒 | J&L Biological | JL13702 |
| 免疫组化 | 免疫组织化学试剂盒 | ZSGB-BIO | SP-9001 |
| 柠檬酸钠缓冲液(抗原修复) | ZSGB-BIO | ZLI-9064 | |
| DAB显色试剂盒 | ZSGB-BIO | ZLI-9018 | |
| 抗HMGB1抗体 | Sangon Biotech | D260488 | |
| 抗TLR9抗体 | Bioss | bs-23640R | |
| 抗NF-κB抗体 | Bioss | bs-0465R | |
| 细胞培养 | DMEM/F12培养基 | Sigma | D6429 |
| 胎牛血清 | Kang Yuan Biology | 20180918 | |
| 青霉素/链霉素 | Beyotime | C0224 | |
| 细胞增殖检测 | CCK-8试剂 | TargetMol | C0005 |
| 酶标仪(SpectraMax iD5) | Molecular Devices | -- | |
| 细胞转染 | Lipo8000转染试剂 | Beyotime | C0533 |
| RNA提取 | Trizol试剂 | Takara Biomedical Technology | 9108 |
| RT-qPCR | 逆转录混合物 | Eastep | 0000418224 |
| SYBR Green荧光染料 | TargetMol | C0006 | |
| 蛋白质提取 | RIPA裂解液 | Beyotime | P0013B |
| Western blot | 抗GAPDH抗体 | GOODHERE | AB-P-R001 |
| 抗HMGB1抗体 | Cell Signaling Technology | 6893 | |
| 抗TLR4抗体 | Bioss | bs-20594R | |
| 抗TLR9抗体 | Bioss | bs-23640R | |
| 抗GLUT4抗体 | Cell Signaling Technology | 2213S | |
| 抗总AKT抗体 | Cell Signaling Technology | 4691 | |
| 抗磷酸化AKT抗体 | Cell Signaling Technology | 4060 | |
| 抗NF-κB抗体 | Bioss | bs-0465R | |
| 辣根过氧化物酶标记二抗 | Absin Bioscience | abs20040ss | |
| ECL化学发光底物 | New Cell & Molecular Biotech | P10300 |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 动物模型建立与分组处理 | 小鼠品系、年龄、体重;DHEA剂量及注射方式;高脂饮食脂肪含量;甘草酸剂量、给药途径及频率;对照组处理(芝麻油、生理盐水) 阅读提示:Materials and methods, Treatment scheme, Figure 1A |
| 代谢功能检测 | 空腹时间;葡萄糖灌胃剂量;胰岛素注射剂量;血糖测量时间点;血清胰岛素ELISA试剂盒及操作;HOMA-IR和HOMA-β计算公式 阅读提示:Materials and methods, Oral glucose tolerance test, insulin tolerance test, and glucose metabolism indexes assessment |
| 卵巢功能评估 | 阴道涂片方法及染色;H&E染色切片厚度及切片数量;卵泡计数标准;激素ELISA试剂盒及检测方法 阅读提示:Materials and methods, Estrous cycle determination; Tissue processing and histological staining; Analysis of serum hormone concentrations |
| 细胞实验:KGN细胞处理 | 细胞系来源;培养基成分;甘草酸处理浓度和时长;CCK-8检测步骤;转染试剂及质粒/siRNA序列 阅读提示:Materials and methods, KGN cell experiments; Cell counting kit-8 assay; Cell transfection; Supplementary Table S1 |
| 分子机制验证 | Western blot抗体及稀释比例;RT-qPCR引物序列;HMGB1过表达和敲低验证方法;蛋白和mRNA表达量检测方法 阅读提示:Materials and methods, Western blot; Real-time quantitative polymerase chain reaction; Results, Figure 6 and 7 |