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基于磁珠的CRISPR诊断方法：提升灵敏度与多重检测能力
Bead-based approaches for increased sensitivity and multiplexing of CRISPR diagnostics
摘要
基于CRISPR的诊断技术已成为快速、准确、便携式病原体检测的重要工具。虽然这类方法在预扩增流程与CRISPR相关酶系统方面进展迅速，但报告系统与反应平台的开发相对滞后。本文通过开发基于微珠的技术体系来解决这些瓶颈：首先，我们构建了一种新型微珠分割荧光素酶报告系统，在CRISPR诊断中其灵敏度较标准荧光报告系统提升最高达20倍；其次，我们开发了高度可部署的微珠反应平台，可在液滴并行反应中同时检测九种不同病毒靶标，对输入RNA的检测灵敏度可达每微升2.5拷贝。通过合成样本与临床样本测试，我们验证了这两种方法在检测灵敏度、速度、多靶标检测能力及部署便利性方面的显著优势。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| KingFisher Flex 磁珠纯化系统 | Thermo Fisher | -- |
| Biotek Cytation 5 酶标仪 | Biotek | -- |
| 液相色谱-质谱系统 | -- | -- |
| 液相色谱-串联质谱系统 | -- | -- |
| 离心机 | -- | -- |
| 移液器 | -- | -- |
| 培养箱 | -- | -- |