弓形虫减毒株RHΔtkl1与PruΔpp2a-c在猪体内展现出作为疫苗候选株的潜力

背景：弓形虫是一种顶复门寄生虫，可感染几乎所有温血动物和人类，引起人畜共患的弓形虫病。感染弓形虫的猪肉被认为是人类感染的重要来源。目前全球尚无针对猪弓形虫病的商业化疫苗，因此亟需一种安全有效的疫苗。本研究评估了两种弓形虫基因敲除减毒株RHΔtkl1和PruΔpp2a-c在猪体内的免疫保护效果。方法：通过肌肉注射接种1×10⁷个减毒株RHΔtkl1或PruΔpp2a-c速殖子的猪，在接种后28天口服攻击1,000个Pru株孢子化卵囊，随后在接种后70天通过腹腔注射1×10⁷个Pru株速殖子进行二次攻击。监测临床症状。采用酶联免疫吸附试验检测弓形虫特异性抗体水平。通过分析病理损伤、病理评分、寄生虫载量、脑包囊负荷及小鼠生物测定评估保护效力。使用GraphPad Prism软件进行时序检验（Mantel-Cox）、t检验及单因素方差分析。结果：接种RHΔtkl1或PruΔpp2a-c的猪仅出现低度发热。结合病理变化和病理评分，这些发现支持两种菌株具有中等安全性。接种RHΔtkl1或PruΔpp2a-c后经弓形虫Pru卵囊和速殖子攻击的猪，其弓形虫特异性抗体水平急剧上升并持续保持高位达5周（P < 0.01）。免疫后病理损伤减轻，脑、心脏、腓肠肌、背最长肌、腰大肌及膈肌等组织中的寄生虫载量显著降低（P < 0.01）。此外，脑包囊负荷显著下降（P < 0.0001）。小鼠生物测定结果证实，与未免疫攻击组相比，免疫后攻击组小鼠脑组织弓形虫基因组DNA阳性比例显著降低（P < 0.0001）。结论：两种减毒活疫苗株RHΔtkl1和PruΔpp2a-c在猪体内表现出中等安全性、免疫原性和保护效力，是抗猪弓形虫病的潜在候选疫苗。