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通过双受体敲除消除CAR T细胞中前列腺素E2信号传导可增强其在实体瘤中的治疗效果
Ablation of prostaglandin E2 signalling through dual receptor knockout in CAR T cells enhances therapeutic efficacy in solid tumours
摘要
嵌合抗原受体（CAR）T细胞疗法在实体瘤中的疗效受到肿瘤微环境（TME）中免疫抑制的限制。前列腺素E2（PGE2）是局部抑制T细胞功能的关键因子。我们假设在CAR T细胞中靶向消除PGE2信号传导可能增强其在富含PGE2的实体瘤中的活性。本研究通过CRISPR-Cas9技术构建了PGE2受体EP2和EP4双敲除（EP2-/-EP4-/-）的CAR T细胞。EP2-/-EP4-/- CAR T细胞在PGE2存在下仍能持续扩增。此外，它们在小鼠同源移植模型和人源异种移植模型中均有效控制了肿瘤生长，并伴随着修饰后T细胞在瘤内的积累与持续存在。针对胰腺导管腺癌（PDAC）、结直肠癌（CRC）和神经内分泌肿瘤（NET）患者的肿瘤样本，也观察到增强的抗肿瘤活性。我们的数据揭示了PGE2介导的抑制对CAR T细胞疗效的不利影响，并指出靶向EP2和EP4是一种潜在策略。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| 数字卡尺 | -- | -- |
| 人CD3微珠 | Miltenyi | -- |
| 细胞滤网 | Miltenyi | 70 µm |
| 细胞滤网 | Miltenyi | 30 µm |
| Dynabeads小鼠T细胞活化剂CD3/CD28 | -- | -- |
| Dynabeads人T细胞活化剂CD3/CD28 | -- | -- |
| RetroNectin | Takara | -- |
| Nucleocuvette电转杯 | Lonza | -- |
| 4D核转染仪 | Lonza | -- |
| MiSeq测序系统 | Illumina | -- |
| DNeasy血液和组织试剂盒 | Quiagen | -- |
| Lumina X5活体成像系统平台 | PerkinElmer | IVIS |
| Countess II细胞计数仪 | Invitrogen | -- |
| 3D微流控培养装置 | AIM Biotech | Dax-01 |
| 尼康Eclipse NiE荧光显微镜 | Nikon | -- |
| 电动载物台 | ProScan | -- |
| ZYLA4.2 Plus USB3相机 | Andor | -- |
| cAMP-Glo检测试剂盒 | Promega | -- |
| xCELLigence-RTCA系统 | -- | -- |