努南综合征的发病机制受NOC2L调节，NOC2L是LZTR1的新相互作用因子，导致p53信号传导受损

背景：单等位基因显性负性LZTR1基因变异已被认为是努南综合征的一种病因，其原因是经典RAS-MAPK信号通路的过度激活。错义LZTR1变异与泛素化缺陷相关，理论上导致Ras底物可用性增加和p53信号改变。我们研究了LZTR1在该通路中的作用。方法：通过N端MYC标记的LZTR1-cDNA的诱变产生单核苷酸替换。将野生型和变异体构建体在哺乳动物细胞中表达，并制备裂解物用于磷酸化蛋白质组学分析。使用Ingenuity通路分析对转录组数据进行分析。使用免疫印迹、免疫荧光、纳米荧光素酶测定和计算机模拟建模来探测显著的磷酸化肽段、蛋白质-蛋白质相互作用和感兴趣的途径。结果：两个与身材矮小相关的杂合LZTR1变异体在体外被证明是热力学稳定的，并与pan-Ras水平升高相关。磷酸化蛋白质组学揭示组蛋白乙酰转移酶抑制剂NOC2L在两种变异体中均上调。这一发现与免疫印迹和免疫荧光一致，与p53乙酰化受损相关。DNA损伤反应的主要效应因子在LZTR1变异体中优先被激活。尽管DNA损伤反应明显激活且p53活性降低，但LC3和磷酸化p70 S6激酶的水平升高。计算机模拟结构建模和纳米荧光素酶测定表明LZTR1与NOC2L相互作用，这种相互作用在两种LZTR1变异体中被破坏。结论：NOC2L和p53形成一个决定p53激活的复合物。我们证明了NOC2L和LZTR1之间先前未知的相互作用，并假设LZTR1作为调节该复合物活性的结合因子。由于NOC2L负调控p53，其上调导致p53介导的转录抑制。由与努南综合征相关的基因突变导致的LZTR1功能减弱，增强NOC2L活性，导致细胞凋亡减少和自噬代偿性增加。