Comparative Evaluation of Antibody-Oligonucleotide Conjugation Strategies for Multiplexed Imaging Applications

抗体寡核苷酸偶联物（AOC）已成为一种多功能工具，其应用范围涵盖诊断、治疗和高维成像等领域。其主要应用之一是多重成像技术，如通过成像共检测（CODEX），该技术能够在单细胞水平上可视化组织网络。在本研究中，我们评估了四种方法——马来酰亚胺修饰法、胺修饰法、DBCO修饰法以及一种位点特异性酶法——以优化用于多重成像应用的AOC制备。我们的评估聚焦于关键性能参数，包括偶联效率、信号亮度、稳定性、重现性和成本效益。尽管每种偶联化学方法均有效，但使用DBCO寡核苷酸的叠氮化学方法显示出更稳定的偶联成功率和随时间推移的信号保持能力。与其他方案相比，该方法能可靠地生成明亮图像，并具有更优的成本效益，这一点在全面的CODEX多重成像实验中得到进一步证实，该实验获得了可重现的空间数据。DBCO方法所观察到的稳定性和重现性表明，它可能有助于减少试剂浪费和人工成本，同时促进更全面的抗体组开发。这些发现表明，DBCO修饰的寡核苷酸偶联方法是制备用于多重成像的AOC的有价值选择，能够解决当前的不足，实现更一致、更广泛和更深入的多重分析。