样本收集与制备
使用残余的细针穿刺活检和积液样本,模拟常规细胞病理学实验室工作流程
从癌症中心常规细胞病理学实验室收集42例样本,包括癌、淋巴瘤、黑色素瘤和非肿瘤性疾病。样本收集后72小时内处理,使用标准实验室方案制备细胞离心涂片,甲醇固定并储存。
Multiplex Cryoimmunostaining in Fine-Needle Aspiration Biopsies and Effusion Samples: Preliminary Results
研究包括临床样本的mCryo与ICC对比验证,涉及多标记物检测和统计学分析,但缺乏功能或机制验证,且样本量有限,属于初步方法评估。
细针穿刺活检样本 积液样本 细胞离心涂片
样本类型包括21例癌、8例淋巴瘤、5例黑色素瘤和8例非肿瘤性样本 mCryo染色使用7种抗体组合(EpCAM、CK7、CD56、TTF-1、p40、CD45、Calretinin)及DAPI ICC染色作为参考对照,使用不同克隆的抗体 样本在采集后72小时内处理,甲醇固定,储存不超过1周 使用X-ZELL cryofixator和cryostainer进行mCryo染色,ICC用BenchMark Ultra自动染色机
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
使用残余的细针穿刺活检和积液样本,模拟常规细胞病理学实验室工作流程
从癌症中心常规细胞病理学实验室收集42例样本,包括癌、淋巴瘤、黑色素瘤和非肿瘤性疾病。样本收集后72小时内处理,使用标准实验室方案制备细胞离心涂片,甲醇固定并储存。
测试X-ZELL mCryo平台在细胞离心涂片上同时检测多种标记物的能力
使用X-ZELL cryofixator和cryostainer按照制造商说明进行冷冻固定和冷冻染色。抗体组合包括EpCAM、CK7、CD56、TTF-1、p40、CD45和Calretinin,以及DAPI核染色。
作为参考对照,验证mCryo染色的准确性
对相同样本的细胞离心涂片进行常规ICC染色,使用不同克隆的抗体在BenchMark Ultra自动染色机上用OptiView检测试剂盒进行。
评估mCryo和ICC染色的特异性和敏感性,并比较两种方法的结果
mCryo染色结果由经过X-ZELL培训的生物医学分析师评估,ICC染色结果由经验丰富的细胞病理学家评估。评估参数包括阳性细胞百分比、染色特异性、背景染色和细胞形态。使用Cronbach's α和Wilcoxon检验进行统计分析。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞离心涂片制备 | Superfrost Plus粘附载玻片 | Epredia | -- |
| Shandon细胞离心机 | Epredia | -- | |
| mCryo染色 | 冷冻固定仪 | X-ZELL | -- |
| 冷冻染色仪 | X-ZELL | -- | |
| 抗EpCAM抗体 | Abcam | -- | |
| 抗CK7抗体 | Abcam | -- | |
| 抗CD56抗体 | BD Bioscience | -- | |
| 抗TTF1抗体 | Miltenyi Biotec | -- | |
| 抗p40抗体 | Abcam | -- | |
| 抗CD45抗体 | EXBIO | -- | |
| 抗钙网蛋白抗体 | Santa Cruz | -- | |
| DAPI | BioLegend | -- | |
| X-ZELL混合显微镜-型号XZHMA | X-ZELL | -- | |
| ICC染色 | BenchMark Ultra免疫染色仪 | Ventana | -- |
| OptiView检测试剂盒 | Ventana | -- | |
| 抗CD56抗体 | Dako | M730401-2 | |
| 抗CK7抗体 | Dako | M701801 | |
| 抗TTF1抗体 | Leica Biosystems | NCL-L-TTF-1 | |
| 抗EpCAM抗体 | Dako | M3525 | |
| 抗CD45抗体 | Dako | M070101-2 | |
| 抗p40抗体 | Zytomed | MSK097 | |
| 抗钙网蛋白抗体 | Ventana | 790-4467 | |
| NanoZoomer S360数字切片扫描仪 | Hamamatsu Photonics | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本收集与处理 | 样本类型包括FNAB和积液,收集后72小时内处理,使用含4.5%牛血清白蛋白和0.45% EDTA的介质 阅读提示:Methods: Patients and Samples |
| 细胞离心涂片制备 | 使用Superfrost Plus载玻片和Shandon cytocentrifuge,离心条件为700 rpm,4分钟 阅读提示:Methods: Cytospin Preparation, Fig. 1a |
| mCryo染色 | 冷冻固定缓冲液I(90%甲醇,0.6mM CaCl2,0.4mM MgCl2)和缓冲液II(1× PBS),孵育条件为−25°C 15分钟和−1.5°C 20分钟 阅读提示:Methods: Cryofixation |
| mCryo染色 | 抗体孵育条件:封闭45分钟,抗体55分钟,均在−1.0°C 阅读提示:Methods: Multiplex Cryoimmunostaining |
| ICC参考染色 | 使用BenchMark Ultra免疫染色仪和OptiView检测试剂盒,DAB作为色原 阅读提示:Methods: Immunocytochemical Staining |