体内T细胞筛选框架

Framework for in vivo T cell screens

作者信息Lauren E Milling, Samuel C Markson, Qin Tjokrosurjo, Nicole M Derosia, Ivy S L Streeter, Grant H Hickok, Ashlyn M Lemmen, Thao H Nguyen, Priyamvada Prathima, William Fithian, Marc A Schwartz, Nir Hacohen, John G Doench, Martin W LaFleur, Arlene H Sharpe
PMID38411617
期刊J Exp Med
发布时间2024-04-01
DOI10.1084/jem.20230699

摘要

体内T细胞筛选是阐明免疫复杂机制的有力工具,然而对于稳健的体内筛选所需的关键设计参数——基因文库大小、细胞移植数量和实验动物数量——仍缺乏共识。本研究提出了体内T细胞筛选框架(FITS),为不同体内实验场景提供确定最优参数的实验与分析指南。通过概念验证,我们运用FITS优化了B16-OVA肿瘤模型中CD8+ T细胞筛选的参数。我们在筛选中引入独特分子标识符(UMIs),以实现:(1)增强统计效力;(2)追踪不同基因敲除(KOs)的T细胞克隆在多个组织中的动态变化。这些发现为免疫细胞的体内筛选提供了实验与分析框架,并通过UMIs在体内T细胞筛选中的应用展示了具体案例。

实验方法

产品清单

名称品牌货号
HiSeq2000测序仪----
BD Celesta流式细胞仪BD--
BD Aria IIu细胞分选仪BD--
DNeasy血液和组织提取试剂盒Qiagen69504
HiSpeed质粒大提试剂盒Qiagen12662
Naive CD8a+ T细胞分选试剂盒Miltenyi130-096-543
LS分选柱Miltenyi130-042-401
Ultrapure抗PE微珠Miltenyi130-105-639
CD8α微珠Miltenyi130-117-044
Qubit dsDNA HS检测试剂盒Thermo Fisher ScientificQ32851
BsmBI限制性内切酶NEBR0580L
LT-1转染试剂Mirus BioMIR2305
RetroNectinTakara BioT100B
Titanium Taq DNA聚合酶Takara638517
Stbl4感受态细胞Thermo Fisher Scientific11635-018
DMEM培养基Gibco11995073
胎牛血清Sigma-AldrichF2442
青霉素/链霉素VWR97063-708
嘌呤霉素VWR10766-886
2%牛血清白蛋白Sigma-AldrichA2153-50G
PBS缓冲液VWR82020-066
RPMI 1640培养基Thermo Fisher Scientific11-875-093
HEPES缓冲液VWR97064-360
非必需氨基酸Thermo Fisher Scientific11-140-050
重组小鼠IL-7VWR10780-184
EDTAVWR45001-122
I型胶原酶Worthington BiochemicalLS004194
RPMI培养基Sigma-AldrichR8758-500ML
Optiprep梯度液Sigma-AldrichD1556
2,2,2-三溴乙醇 (Avertin)VWRAAA18706-22
70微米滤网----