样品采集与处理
收集具有代表性的废水样本,用于病毒检测和测序。
从亚利桑那州坦佩市12个采样点每周采集三次废水样本,共1,408份,经过滤和浓缩提取核酸。
Seasonality of respiratory, enteric, and urinary viruses revealed by wastewater genomic surveillance
研究包含长期环境监测和多种分析(多样性、聚类、相关分析),但缺乏功能实验和机制验证。
废水样本 12个社区级采样点
采样点数量及采样频率 废水病毒载量与临床病例率的相关性 季节对病毒多样性的影响
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
收集具有代表性的废水样本,用于病毒检测和测序。
从亚利桑那州坦佩市12个采样点每周采集三次废水样本,共1,408份,经过滤和浓缩提取核酸。
通过靶向富集测序检测废水中多种病毒。
使用Illumina RNA Prep with Enrichment Kit Viral Surveillance Panel进行靶向富集,然后在NextSeq2000上测序。
将测序reads映射至病毒基因组数据库,以量化病毒相对丰度。
对fastq文件进行质量过滤,使用Bowtie2比对至自定义数据库,计算reads per million (RPM)。
评估病毒群落的多样性和周期性变化。
计算Shannon指数和Bray-Curtis距离,使用线性混合效应模型和PERMANOVA检验季节和地点的影响,并使用k-means聚类分析群落状态。
比较废水中呼吸道病毒信号与临床监测数据。
分析SARS-CoV-2、流感A、季节性冠状病毒等,与临床病例率相关。
分析废水中多瘤病毒的基因型分布。
对BK多瘤病毒进行VP1基因分型,使用BKTyper算法。
鉴定废水中肠道病毒的物种和变异。
对星状病毒和诺如病毒进行种/变异水平分析,使用定制数据库和BWA比对。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 样本处理 | Amicon Ultra-15离心过滤器 | Millipore Sigma | -- |
| 核酸提取 | RNeasy小型试剂盒 | Qiagen | -- |
| 文库制备 | Illumina RNA制备和富集试剂盒病毒监测面板 | Illumina | -- |
| 测序 | NextSeq2000 | Illumina | -- |
| qPCR | QuantStudio 7 Flex实时PCR系统 | Applied Biosystems | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 样本采集 | 采样点数量、采样频率、采样时间范围 阅读提示:Materials and Methods: Sample collection and processing |
| 测序 | 靶向富集面板、测序平台、read长度 阅读提示:Materials and Methods: Next-generation sequencing |
| 生物信息学分析 | 参考数据库、比对软件、质控参数 阅读提示:Materials and Methods: Next-generation sequencing, Viral genome sequencing and sequencing analysis |
| 统计与多样性分析 | 固定效应和随机效应模型、PERMANOVA设计、聚类方法 阅读提示:Materials and Methods: Linear mixed effects and PERMANOVA analysis, k-Means clustering and community state analysis |
| 呼吸道病毒比较 | 临床数据来源、相关分析方法、时间窗口 阅读提示:Materials and Methods: Respiratory virus analysis |