废水基因组监测揭示呼吸道、肠道和泌尿道病毒的季节性

Seasonality of respiratory, enteric, and urinary viruses revealed by wastewater genomic surveillance

作者信息Matthew F Smith, Rabia Maqsood, Regan A Sullins, Erin M Driver, Rolf U Halden, Efrem S Lim
PMID38712930
期刊mSphere
发布时间2024-05-29
DOI10.1128/msphere.00105-24

实验完整度

中

研究包含长期环境监测和多种分析(多样性、聚类、相关分析),但缺乏功能实验和机制验证。

主要模型

废水样本 12个社区级采样点

重点核对

采样点数量及采样频率 废水病毒载量与临床病例率的相关性 季节对病毒多样性的影响

摘要

废水监测可以揭示人群层面的传染病负担,且可通过废水监测可靠评估突发公共卫生威胁。虽然用于废水微生物监测的分子方法传统上依赖基于PCR的方法,但下一代测序(NGS)可以通过对多种不同病原体的基因组分析提供更深入的见解。我们对美国亚利桑那州坦佩大都会地区12个社区级采样点收集的1,408份复合废水样本进行了为期一年的测序监测,结果表明废水病毒的变异受季节时间和地点驱动。废水中病毒的时间动态呈周期性变化,相隔23周的样本之间差异最大(即冬季与夏季、春季与秋季)。我们鉴定了多种不同的泌尿和肠道病毒,包括多瘤病毒、星状病毒和诺如病毒,并表明它们的基因型/亚型随季节变化。我们发现,虽然某些呼吸道病毒(如严重急性呼吸综合征冠状病毒2型(SARS-CoV-2))的废水数据与临床病例率密切相关,但对于其他病毒(如人类冠状病毒229E),实验室报告的病例发病率与废水中高病毒载量的激增不一致。这些结果证明了废水测序在为公共卫生决策提供信息方面的实用性。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
废水中的病毒组成是否具有季节性变化,以及废水测序能否反映社区中的病毒传播情况。
核心机制
废水病毒群落的组成受季节和采样地点的显著影响,呈周期性变化,冬季和夏季、春季和秋季差异最大。
主要证据
基于1,408份废水样本的宏基因组测序,发现病毒多样性随季节变化,且不同病毒与临床数据的相关性存在差异。
研究意义
废水测序可作为公共卫生监测工具,为传染病暴发提供早期预警,并可揭示临床监测的不足。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

样品采集与处理

收集具有代表性的废水样本,用于病毒检测和测序。

从亚利桑那州坦佩市12个采样点每周采集三次废水样本,共1,408份,经过滤和浓缩提取核酸。

2

文库制备与测序

通过靶向富集测序检测废水中多种病毒。

使用Illumina RNA Prep with Enrichment Kit Viral Surveillance Panel进行靶向富集,然后在NextSeq2000上测序。

3

生物信息学分析

将测序reads映射至病毒基因组数据库,以量化病毒相对丰度。

对fastq文件进行质量过滤,使用Bowtie2比对至自定义数据库,计算reads per million (RPM)。

4

多样性与统计分析

评估病毒群落的多样性和周期性变化。

计算Shannon指数和Bray-Curtis距离,使用线性混合效应模型和PERMANOVA检验季节和地点的影响,并使用k-means聚类分析群落状态。

5

呼吸道病毒分析

比较废水中呼吸道病毒信号与临床监测数据。

分析SARS-CoV-2、流感A、季节性冠状病毒等,与临床病例率相关。

6

多瘤病毒基因分型

分析废水中多瘤病毒的基因型分布。

对BK多瘤病毒进行VP1基因分型,使用BKTyper算法。

7

肠道病毒分析

鉴定废水中肠道病毒的物种和变异。

对星状病毒和诺如病毒进行种/变异水平分析,使用定制数据库和BWA比对。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
Amicon Ultra-15离心过滤器Millipore Sigma--
RNeasy小型试剂盒Qiagen--
Illumina RNA制备和富集试剂盒病毒监测面板Illumina--
NextSeq2000Illumina--
QuantStudio 7 Flex实时PCR系统Applied Biosystems--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
样本采集
采样点数量、采样频率、采样时间范围
阅读提示:Materials and Methods: Sample collection and processing
测序
靶向富集面板、测序平台、read长度
阅读提示:Materials and Methods: Next-generation sequencing
生物信息学分析
参考数据库、比对软件、质控参数
阅读提示:Materials and Methods: Next-generation sequencing, Viral genome sequencing and sequencing analysis
统计与多样性分析
固定效应和随机效应模型、PERMANOVA设计、聚类方法
阅读提示:Materials and Methods: Linear mixed effects and PERMANOVA analysis, k-Means clustering and community state analysis
呼吸道病毒比较
临床数据来源、相关分析方法、时间窗口
阅读提示:Materials and Methods: Respiratory virus analysis