FOXC1介导的LINC00301通过调控HIF1α通路促进非小细胞肺癌进展并触发免疫抑制微环境

背景：长链非编码RNA（lncRNAs）广泛参与多种癌症的发生和转移。然而，lncRNA在非小细胞肺癌（NSCLC）中的详细分子机制仍未明确。方法：采用qPCR验证LINC00301在NSCLC临床标本或细胞系中的表达。采用荧光原位杂交（FISH）确定LINC00301在NSCLC细胞中的定位。采用染色质免疫沉淀（ChIP）验证FOXC1与LINC00301启动子之间的结合活性。采用RNA免疫沉淀（RIP）探索LINC00301与EZH2之间的结合活性。采用RNA pull-down联合dot-blot、蛋白结构域作图、RNA电泳迁移率变动分析（EMSA）确定LINC00301与EZH2之间的详细结合区域。采用Alpha assay定量评估LINC00301与EZH2之间的相互作用。结果：通过分析NSCLC样本中差异表达lncRNAs与预后的关系，发现LINC00301在NSCLC中高表达，并与其预后密切相关。体外和体内实验表明，LINC00301促进细胞增殖，解除NSCLC细胞周期阻滞，促进细胞迁移和侵袭，并抑制NSCLC细胞凋亡。此外，LINC00301通过靶向TGF-β增加LA-4/SLN-205来源肿瘤中的调节性T细胞（Treg），同时减少CD8+ T细胞群。转录因子FOXC1介导NSCLC中LINC00301的表达。生物信息学预测和体外实验表明，LINC00301（83-123核苷酸[nt]）可直接结合zeste homolog 2增强子（EZH2）（612-727氨基酸[aa]）以促进ELL蛋白相关因子2（EAF2）启动子上的H3K27me3。EAF2直接结合并稳定von Hippel-Lindau蛋白（pVHL），因此下调的EAF2通过调控NSCLC细胞中的pVHL增强缺氧诱导因子1α（HIF1α）的表达。此外，我们还发现LINC00301可以作为竞争性内源RNA（ceRNA）对抗miR-1276，以加速NSCLC细胞胞质中HIF1α的表达。结论：总之，我们目前的研究揭示了LINC00301在临床标本以及细胞和动物实验中的致癌作用，阐明了FOXC1/LINC00301/EZH2/EAF2/pVHL/HIF1α和FOXC1/LINC00301/miR-1276/HIF1α通路的潜在作用和机制，为NSCLC提供了新的见解和潜在的治疗靶点。