靶向基因编辑与CYBA和CYBB近通用cDNA插入作为慢性肉芽肿病的治疗方法

慢性肉芽肿病（CGD）是一种由NADPH氧化酶缺陷引起的严重先天性免疫缺陷。本研究开发了基于CRISPR/Cas9的基因编辑策略，用于纠正导致CGD的CYBA和CYBB基因变异。针对X连锁CGD，我们通过靶向整合截短的CYBB cDNA至CD34+造血干细胞和祖细胞（HSPCs），开发了一种近乎通用的基因编辑策略。研究过程中发现明显的脱靶编辑和染色体易位现象，这些负面影响了基因编辑HSPCs在免疫缺陷小鼠中的植入能力。然而，通过采用高保真Cas9以最小化脱靶编辑，我们证明了基因编辑HSPCs的多谱系植入潜能得以恢复。此外，为进一步提升安全性，我们开发了D10A Cas9n编辑方法，该方法未检测到脱靶活性或染色体易位。总体而言，通过对不同基因编辑方法的风险评估，我们提出了一种基于D10A Cas9n的、安全性更高的策略，为CGD患者提供了潜在治愈性治疗方案。