临床耳念珠菌菌株对杀生物剂的敏感性变异:对医疗机构感染控制的影响

Variable sensitivity of clinical Candida auris strains to Biocides: implications for infection control in Healthcare Settings

作者信息Sidre Erganis, Ali Ozturk, Sema Turan Uzuntas, Fusun Kirca, Alper Dogan, Bedia Dinc, Ayse Kalkanci
PMID39497071
发布时间2024-11
DOI10.1186/s12866-024-03605-w

实验完整度

研究包含体外杀生物剂活性测定(悬浮和载体试验)、生物膜形成测定和抗真菌药敏试验,但缺乏动物模型或临床验证等进一步证据层级。

主要模型

临床C. auris菌株(clade 1,n=8) 参考菌株C. auris CDC B11903(clade 4) Candida albicans ATCC 10231(质控和对照)

重点核对

菌株的clade鉴定(全基因组测序) 杀生物剂浓度(氯500 ppm和200 ppm,氯己定4%和2%,乙醇70%) 接触时间(1、5、30分钟) 清洁和肮脏条件(BSA或红细胞) 定量悬浮试验和载体试验(EN 13624和EN 14562)

摘要

目的:耳念珠菌是一种多重耐药酵母菌,因其形成生物膜的能力和对常见消毒剂的耐药性,在医疗机构中构成重大挑战。了解其对医院消毒实践中使用的杀生物剂的敏感性对于感染控制至关重要。我们通过杀生物剂活性试验,研究了来自不同患者的8株临床耳念珠菌菌株和1株参考菌株(CDC B11903)对杀生物剂的敏感性。方法:通过MALDI-TOF MS确认菌种鉴定,通过全基因组测序确定进化枝分化和系统发育分类。使用MTT法评估生物膜形成。根据CLSI标准测试抗真菌敏感性。通过肉汤微量稀释法(遵循CLSI标准)以及定量悬浮和载体试验(遵循EN标准)评估消毒剂(包括氯、氯己定和苯扎氯铵)的有效性。结果:所有临床菌株均鉴定为进化枝1,参考菌株为进化枝4,所有菌株均表现出生物膜形成。进化枝1菌株对氟康唑耐药,MIC值范围为8至32µg/ml,而对其他抗真菌药敏感。杀生物剂的肉汤微量稀释MIC试验表明,所有菌株对苯扎氯铵均表现出耐药性。氯和氯己定显示出可变的效果,取决于浓度和环境清洁度。含酒精的洗手液从使用第一分钟起对耳念珠菌有效。结论:该研究强调了耳念珠菌对不同杀生物剂的可变敏感性,强调了从医疗环境中根除该病原体的挑战。我们的研究结果主张在医院环境中仔细选择消毒剂,强调需要高浓度氯和氯己定溶液来对抗耳念珠菌,即使在特别清洁的环境中也是如此。

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
临床耳念珠菌菌株对常用杀生物剂(氯、氯己定、苯扎氯铵和乙醇)的敏感性如何,以及这种敏感性是否因clade而异?
核心机制
耳念珠菌对杀生物剂的敏感性因菌株和clade而异,clade 1菌株对苯扎氯铵耐药,对氯和氯己定敏感,而clade 4参考菌株对氯的敏感性较低。
主要证据
通过肉汤微量稀释法测定MIC值显示苯扎氯铵MIC为16-32 mg/L,氯为0.01-0.02 mg/L,氯己定为0.5-1 mg/L;EN 13624和EN 14562活性试验显示500 ppm氯、4%氯己定和70%乙醇在清洁条件下有效,而200 ppm氯和2%氯己定效果不佳。
研究意义
本研究为医疗机构消毒剂的选择提供了依据,建议使用500 ppm氯和4%氯己定,并强调环境清洁的重要性,以控制耳念珠菌感染。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

菌株鉴定和分型

确认菌种身份和遗传背景,区分不同clade。

使用MALDI-TOF MS进行菌种鉴定,通过全基因组测序确定clade和系统发育关系。

2

生物膜形成能力评估

评估所有菌株是否具有生物膜形成能力,以了解其表面存活潜力。

使用MTT法在96孔板中量化生物膜形成,根据OD值分级为弱、中、强。

3

抗真菌药物敏感性测试

确定菌株对常用抗真菌药物的敏感性,特别是氟康唑。

使用CLSI M27-A2微量稀释法测试9种抗真菌药物的MIC值。

4

杀生物剂MIC测定

评估氯、氯己定和苯扎氯铵对耳念珠菌的固有敏感性。

使用CLSI M27-A2方法进行肉汤微量稀释,测定MIC值。

5

杀生物剂活性测试

模拟实际消毒条件,评估杀生物剂在清洁和肮脏环境下的杀灭效果。

按照EN 13624和EN 14562标准进行定量悬浮和载体试验,测试不同浓度和接触时间下的杀灭效果。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
MALDI-TOF质谱仪(Vitek MS)bioMerieux--
MinION™ FLO-MIN106测序仪Oxford Nanopore Technologies--
连接测序试剂盒(SQK-LSK109)Oxford Nanopore Technologies--
Native条形码扩展试剂盒(EXP-NBD114)Oxford Nanopore Technologies--
溶菌酶--12650-88-3
蛋白酶K--39450-01-6
MTT--298-93-1
二甲基亚砜--67-68-5
两性霉素B--1397-89-3
氟康唑--86386-73-4
伏立康唑--137234-62-9
伊曲康唑--84625-61-6
泊沙康唑--171228-49-2
卡泊芬净--179463-17-3
阿尼芬净--166663-25-8
氟胞嘧啶--2022-85-7
艾沙康唑--241479-67-4
氯己定--55-56-1
苯扎氯铵--8001-54-5
牛血清白蛋白(BSA)--9048-46-8
绵羊红细胞悬液----

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
菌株鉴定和分型
菌株的clade鉴定结果、全基因组测序方法
阅读提示:见Methods 'Strains, species identification, and whole-genome sequencing'
生物膜形成检测
MTT法条件:MTT浓度、孵育时间、OD值分级标准
阅读提示:见Methods 'In vitro biofilm formation assay'
抗真菌药敏试验
药物浓度范围、质控菌株、MIC折点判断标准
阅读提示:见Methods 'Antifungal drug susceptibility tests'
杀生物剂MIC测定
杀生物剂浓度范围、方法(CLSI M27-A2)
阅读提示:见Methods 'Susceptibility tests of biocides by broth microdilution'
杀生物剂活性测试
初始酵母浓度、接触时间、清洁/肮脏条件、中和剂成分、有效性判断标准(log10减少)
阅读提示:见Methods 'Yeasticidal activities of biocides by quantitative suspension test and quantitative carrier test' 和结果部分