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足细胞特异性KLF4是维持肾脏壁层上皮细胞静止状态所必需的
Podocyte-specific KLF4 is required to maintain parietal epithelial cell quiescence in the kidney
摘要
足细胞丢失引发壁层上皮细胞(PECs)异常活化和增殖是增殖性肾小球病的关键致病事件。足细胞特异性Krüppel样因子4(KLF4)——一种锌指转录因子——对维持足细胞稳态和PECs静息状态至关重要。通过对足细胞特异性敲低Klf4的小鼠进行肾小球RNA测序、串联质谱分析和单核RNA测序，我们鉴定了因足细胞丢失触发PEC活化的细胞特异性转录变化。结合计算机模拟染色质免疫沉淀技术，发现足细胞与PECs之间依赖KLF4及下游信号转导和转录激活因子3(STAT3)信号通路的关键配体-受体相互作用，如纤连蛋白1(FN1)-αVβ6。在PECs中敲低Itgb6可减弱PEC活化。此外，足细胞特异性诱导人KLF4表达或药物抑制下游STAT3活化，能降低FN1和整合素β6(ITGB6)表达，减轻小鼠足细胞丢失和PEC活化。靶向足细胞-PEC交互作用可能是治疗增殖性肾小球病的重要策略。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| 磁性Dynabeads | -- | -- |
| BD FACSAria III细胞分选仪 | BD | FACSAria III |
| 胶原包被板 | -- | -- |
| 100微米细胞滤网 | -- | -- |
| 磁铁 | -- | -- |
| RNAeasy试剂盒 | Qiagen | -- |
| p-1000吸头 | -- | -- |
| 25G注射器 | -- | -- |
| 30微米CellTrics滤器 | -- | CellTrics |
| 血细胞计数器 | -- | -- |
| 10X Chromium系统 | 10X Genomics | Chromium |
| Illumina NextSeq 550平台 | Illumina | NextSeq 550 |
| 20厘米长 ReproSil C-18 (3微米颗粒) 色谱柱 | -- | ReproSil C-18 |
| Q Exactive HF混合四极杆-Orbitrap质谱仪 | Thermo Fisher Scientific | Q Exactive HF |
| TripleTOF 5600+质谱仪 | Sciex | 5600+ |
| TRIzol试剂 | Life Technologies | -- |
| SuperScript IV VILO预混液 | Life Technologies | -- |
| PowerUp SYBR qPCR预混液 | -- | -- |
| ABI QuantStudio 3系统 | Applied Biosystems | QuantStudio 3 |
| 尼康 Eclipse i90显微镜 | Nikon | Eclipse i90 |
| 数码相机 | -- | -- |