腺病毒引发抗原与体细胞超突变在VITT中的作用

背景：疫苗（或病毒）诱导的免疫性血小板减少症和血栓形成（VITT）是腺病毒载体新冠疫苗接种或自然腺病毒感染后的一种罕见促血栓并发症。VITT由针对高阳离子蛋白血小板因子4（PF4）的血小板活化抗体介导。潜在的抗原触发因素和免疫发病机制仍然未知。方法：我们使用抗体蛋白质组学确定了21例VITT患者的抗PF4抗体的氨基酸序列，并对100例VITT患者的免疫球蛋白轻链高变基因进行了测序。为了确定腺病毒触发因素，我们利用抗PF4和抗腺病毒蛋白抗体的抗原结合指纹来识别共享的血清单克隆型，随后使用腺病毒蛋白肽和重组抗PF4 VITT抗体定位模拟线性表位。结果：VITT抗体的基因组和蛋白质组学分析揭示了一个共享的免疫球蛋白轻链等位基因3-21（IGLV3-21*02或*03），其中包含一个关键的体细胞超突变K31E（带正电荷的赖氨酸变为带负电荷的谷氨酸；位置31）。只有针对腺病毒核心蛋白VII（pVII）纯化的抗体含有与VITT指纹匹配的抗PF4种类；针对完整病毒粒子或其他腺病毒蛋白的抗体则没有。交叉反应性IgG被定位到pVII上的一个碱性线性表位。值得注意的是，一种致病性抗PF4 VITT抗体，当回复突变至种系（K31）时，在体外和体内均失去了其促血栓活性，并优先结合pVII，直接支持了超突变在从腺病毒pVII到PF4的抗原转移中的作用。结论：VITT发生于携带免疫球蛋白轻链等位基因3-21*02或*03的个体，其识别限定的腺病毒核心蛋白pVII表位的抗体中发生特异性体细胞超突变，该突变将抗体靶向错误地导向PF4。（该研究经格赖夫斯瓦尔德大学医学伦理委员会批准（BB 052/21a），并在欧盟药物警戒登记处（EUPAS45098，完整研究方案可在https://www.encepp.eu/encepp/viewResource.htm?id=47159获取）和德国临床试验注册处（DRKS00025738）注册。）