建立回顾性队列
评估AL/MDS患者培养阳性IPA的临床特征及预后。
从2011年1月至2022年2月,在MD Anderson癌症中心回顾性纳入74例AL或MDS合并培养阳性确定或很可能IPA的成人患者,收集人口统计学、基础疾病、白血病状态及实验室检查数据。
Blastemia portrays a poor prognosis in acute leukemia patients with invasive pulmonary aspergillosis
临床回顾性队列与体外实验双重验证
急性白血病或骨髓增生异常综合征患者队列 CD34+白血病母细胞 小鼠C1498 AML细胞 人外周血单个核细胞
患者队列:74例AL/MDS患者,57%有母细胞血症 B-index > 90与42天死亡率和早期抗真菌治疗失败相关 ≥3线化疗史与42天死亡率和早期治疗失败相关 体外实验:CD34+母细胞及C1498细胞对A. fumigatus的抑制活性极低 Transwell实验:母细胞存在时PBMCs对A. fumigatus的抑制被削弱
提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。
按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。
评估AL/MDS患者培养阳性IPA的临床特征及预后。
从2011年1月至2022年2月,在MD Anderson癌症中心回顾性纳入74例AL或MDS合并培养阳性确定或很可能IPA的成人患者,收集人口统计学、基础疾病、白血病状态及实验室检查数据。
量化从入院至IPA诊断及IPA诊断后42天的母细胞血症和中性粒细胞减少症的时间累积负担。
采用AUC方法计算B-index(绝对外周血母细胞计数AUC)和D-index(绝对中性粒细胞计数低于500/μL的AUC),并采用三种归一化方法(原始AUC、按住院天数、按母细胞血症/中性粒细胞减少症天数)以适应住院时间差异。
比较不同B-index和D-index水平下患者的42天死亡率和抗真菌治疗反应。
根据42天生存状态分析B-index和D-index的分布,使用ROC曲线和Youden指数确定最佳截断值,并构建多变量logistic回归模型分析独立预测因子。
探讨白血病母细胞是否缺乏抗真菌活性,并能否干扰PBMC介导的真菌抑制。
将烟曲霉AF-293分生孢子与CD34+母细胞、C1498细胞或PBMC共培养20小时,测定真菌代谢(XTT法)和菌丝生长(IncuCyte成像);采用Transwell实验检测母细胞分泌的可溶性介质对PBMC介导的烟曲霉抑制的影响。
按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。
| 实验环节 | 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|---|
| 细胞分离 | Ficoll-Paque Premium | Fisher Scientific | #45-001-752 |
| CD34+细胞分选 | CD34磁珠分选试剂盒(超纯) | Miltenyi Biotec | #130-100-453 |
| 细胞培养 | StemSpan SFEM II培养基 | Stem Cell Technologies | #09605 |
| GlutaMAX添加剂 | Thermo Fisher Scientific | #35050061 | |
| 促血小板生成素 | R&D systems | #288-TP-025 | |
| 干细胞因子 | R&D systems | #255-SC-010 | |
| FLT-3配体 | R&D systems | #308-FK-005 | |
| 共培养实验 | 24孔板 | Corning/Falcon | #353047 |
| RPMI-1640培养基 | Gibco | #A10491-01 | |
| 胎牛血清 | Atlas Biologicals | #F-0500-A | |
| XTT | -- | -- | |
| 细菌共培养 | C1498细胞 | American Type Culture Collection | #TIB-49 |
| 共培养实验 | 外周血单个核细胞 | IQ Biosciences | #IQB-PBMC102 |
| 96孔板 | Corning/Falcon | #353072 | |
| 活细胞成像 | IncuCyte ZOOM系统 | Sartorius | -- |
| Transwell实验 | 0.4 μm孔径聚酯膜插入物 | Corning | #3470 |
| 统计分析 | SAS 9.4统计软件 | SAS Institute Inc. | -- |
| Prism 10统计软件 | GraphPad Software | -- |
汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。
| 环节 | 核对要点 |
|---|---|
| 患者队列 | 纳入排除标准、样本量(74例)、随访时间(42天)、主要终点(42天死亡率)和次要终点(14天治疗反应) 阅读提示:Methods: Retrospective study, Outcomes; Table 1 |
| B指数和D指数计算 | B-index和D-index的定义、计算周期(入院至诊断、诊断后42天)、归一化方法(原始、h-、d-)、最佳截断值(B-index>90, h-D-index>12) 阅读提示:Methods: Blastemia and neutropenia indices, Statistical analysis; Figure 1A |
| 多变量模型 | 多变量logistic回归模型中的协变量(年龄、性别、化疗线数、ELN分类、移植史、B-index、D-index等)、调整后优势比和置信区间 阅读提示:Methods: Statistical analysis; Results: Multivariable models; Table 3 |
| 体外共培养 | 细胞系(C1498)、原代CD34+细胞来源、效应细胞(PBMC)、真菌菌株(AF-293)、共培养比例(E:T 100或500)、培养时间(20小时)、检测方法(XTT、IncuCyte) 阅读提示:Methods: In-vitro experiments; Figure 3 |
| Transwell实验 | 插入物孔径(0.4 μm)、细胞数量(blasts 100,000,PBMCs 200,000)、分生孢子数量(200,000)、培养时间(6小时+14小时)、XTT检测 阅读提示:Methods: In-vitro experiments; Figure 3C-D |