原始标题的英文

Blastemia portrays a poor prognosis in acute leukemia patients with invasive pulmonary aspergillosis

作者信息Sung-Yeon Cho, Sebastian Wurster, Ying Jiang, Alexandre Bazinet, Yang Hui, Russel E Lewis, Takahiro Matsuo, Nathaniel Albert, Guillermo Garcia-Manero, Dimitrios P Kontoyiannis
PMID40532856
期刊J Infect
发布时间2025-08
DOI10.1016/j.jinf.2025.106535

实验完整度

临床回顾性队列与体外实验双重验证

主要模型

急性白血病或骨髓增生异常综合征患者队列 CD34+白血病母细胞 小鼠C1498 AML细胞 人外周血单个核细胞

重点核对

患者队列:74例AL/MDS患者,57%有母细胞血症 B-index > 90与42天死亡率和早期抗真菌治疗失败相关 ≥3线化疗史与42天死亡率和早期治疗失败相关 体外实验:CD34+母细胞及C1498细胞对A. fumigatus的抑制活性极低 Transwell实验:母细胞存在时PBMCs对A. fumigatus的抑制被削弱

摘要

Objectives: Severe and prolonged neutropenia is associated with poor outcomes of invasive pulmonary aspergillosis (IPA) in leukemia patients. Given the high frequency of IPA in patients with relapsed/refractory leukemia, we studied the association of peripheral blood blast burden (blastemia), IPA outcomes, and antifungal immune failure, even without neutropenia. Methods: We retrospectively reviewed adult patients with acute leukemia (AL) or myelodysplastic syndrome and culture-positive proven/probable IPA (2011-2022). Blast and neutropenia indices were calculated and incorporated into multi-variable prognostic models. The impact of blasts on immune cell-mediated fungal clearance was studied in vitro. Results: Among 74 patients, 69% had neutropenia and 57% had blastemia at IPA diagnosis. Blast index ≥90 at IPA diagnosis and ≥3 lines of prior chemotherapies were independent predictors of 42-day mortality and early antifungal treatment failure. Leukemic blasts had minimal immune activity against Aspergillus fumigatus and impaired fungal inhibition by peripheral blood mononuclear cells. Conclusion: Blastemia is common in contemporary leukemia patients with IPA and is a significant risk factor for poor IPA outcomes, possibly due to interference with fungal clearance by immune cells. Therefore, blastemia should be considered as a risk stratification parameter in future mycology trials and as an experimental variable in preclinical IPA models.

实验结论

提炼研究问题、关键发现与证据,快速把握文章的核心贡献。

研究问题
急性白血病患者中,外周血母细胞负荷(blastemia)是否与侵袭性肺曲霉病(IPA)的不良结局及抗真菌免疫失败相关,且独立于中性粒细胞减少症?
核心机制
白血病母细胞虽自身缺乏抗真菌活性,但可能通过分泌可溶性介质干扰外周血单个核细胞对烟曲霉的清除能力,从而影响抗真菌治疗反应。
主要证据
回顾性队列显示B-index>90与42天死亡率和早期抗真菌治疗失败独立相关;体外实验显示母细胞对烟曲霉的抑制作用极低,且通过Transwell实验证实其分泌的介质可削弱PBMC介导的真菌抑制。
研究意义
母细胞血症应考虑作为未来真菌学试验的风险分层参数,并作为临床前IPA模型中的实验变量。

研究路径

按研究推进顺序梳理实验设计、验证步骤与关键观察。

1

建立回顾性队列

评估AL/MDS患者培养阳性IPA的临床特征及预后。

从2011年1月至2022年2月,在MD Anderson癌症中心回顾性纳入74例AL或MDS合并培养阳性确定或很可能IPA的成人患者,收集人口统计学、基础疾病、白血病状态及实验室检查数据。

2

计算B指数和D指数

量化从入院至IPA诊断及IPA诊断后42天的母细胞血症和中性粒细胞减少症的时间累积负担。

采用AUC方法计算B-index(绝对外周血母细胞计数AUC)和D-index(绝对中性粒细胞计数低于500/μL的AUC),并采用三种归一化方法(原始AUC、按住院天数、按母细胞血症/中性粒细胞减少症天数)以适应住院时间差异。

3

评估母细胞血症和中性粒细胞减少症与预后的关联

比较不同B-index和D-index水平下患者的42天死亡率和抗真菌治疗反应。

根据42天生存状态分析B-index和D-index的分布,使用ROC曲线和Youden指数确定最佳截断值,并构建多变量logistic回归模型分析独立预测因子。

4

体外验证母细胞对烟曲霉的作用

探讨白血病母细胞是否缺乏抗真菌活性,并能否干扰PBMC介导的真菌抑制。

将烟曲霉AF-293分生孢子与CD34+母细胞、C1498细胞或PBMC共培养20小时,测定真菌代谢(XTT法)和菌丝生长(IncuCyte成像);采用Transwell实验检测母细胞分泌的可溶性介质对PBMC介导的烟曲霉抑制的影响。

研究方法

按研究目的归类文中使用的方法,便于定位所需技术。

产品清单

实验环节名称品牌货号
Ficoll-Paque PremiumFisher Scientific#45-001-752
CD34磁珠分选试剂盒(超纯)Miltenyi Biotec#130-100-453
StemSpan SFEM II培养基Stem Cell Technologies#09605
GlutaMAX添加剂Thermo Fisher Scientific#35050061
促血小板生成素R&D systems#288-TP-025
干细胞因子R&D systems#255-SC-010
FLT-3配体R&D systems#308-FK-005
24孔板Corning/Falcon#353047
RPMI-1640培养基Gibco#A10491-01
胎牛血清Atlas Biologicals#F-0500-A
XTT----
C1498细胞American Type Culture Collection#TIB-49
外周血单个核细胞IQ Biosciences#IQB-PBMC102
96孔板Corning/Falcon#353072
IncuCyte ZOOM系统Sartorius--
0.4 μm孔径聚酯膜插入物Corning#3470
SAS 9.4统计软件SAS Institute Inc.--
Prism 10统计软件GraphPad Software--

关键环节

汇总复现实验时建议重点确认的条件及原文阅读提示。

环节核对要点
患者队列
纳入排除标准、样本量(74例)、随访时间(42天)、主要终点(42天死亡率)和次要终点(14天治疗反应)
阅读提示:Methods: Retrospective study, Outcomes; Table 1
B指数和D指数计算
B-index和D-index的定义、计算周期(入院至诊断、诊断后42天)、归一化方法(原始、h-、d-)、最佳截断值(B-index>90, h-D-index>12)
阅读提示:Methods: Blastemia and neutropenia indices, Statistical analysis; Figure 1A
多变量模型
多变量logistic回归模型中的协变量(年龄、性别、化疗线数、ELN分类、移植史、B-index、D-index等)、调整后优势比和置信区间
阅读提示:Methods: Statistical analysis; Results: Multivariable models; Table 3
体外共培养
细胞系(C1498)、原代CD34+细胞来源、效应细胞(PBMC)、真菌菌株(AF-293)、共培养比例(E:T 100或500)、培养时间(20小时)、检测方法(XTT、IncuCyte)
阅读提示:Methods: In-vitro experiments; Figure 3
Transwell实验
插入物孔径(0.4 μm)、细胞数量(blasts 100,000,PBMCs 200,000)、分生孢子数量(200,000)、培养时间(6小时+14小时)、XTT检测
阅读提示:Methods: In-vitro experiments; Figure 3C-D