MicroRNA-142增强IL1RAP CAR-T细胞在急性髓系白血病中的活性

背景：白细胞介素-1受体辅助蛋白（IL1RAP）在急性髓系白血病（AML）的原始细胞和白血病干细胞（LSCs）上选择性表达，而在正常造血干细胞（HSCs）上几乎不表达，这使其成为嵌合抗原受体（CAR）T细胞治疗的有吸引力的靶点。 方法：我们开发了一种新型的靶向IL1RAP的CAR-T细胞，使用单链Fab（24scFab）融合CD28和CD3ζ共刺激结构域。通过在24scFab结构域的互补决定区（CDR）环中引入两个点突变，我们还构建了具有突变IL1RAP结合位点的CAR-T细胞作为对照。我们在细胞系来源（CD）和患者来源（PD）异种移植模型（X）中测试了这些CAR-T细胞。为了评估IL1RAP CAR-T细胞的持久性和活性，我们测试了两种方法。首先，我们突变了CD3ζ结构域内三个免疫受体酪氨酸激活基序（ITAMs）中的两个（即IL1RAP-1XX CAR-T）。其次，我们向AML异种移植小鼠联合给予合成的miR-142模拟物（M-miR-142）和IL1RAP CAR-T细胞，该模拟物先前被证明能增强T细胞的抗白血病活性。 结果：IL1RAP CAR-T细胞在AML CDX和PDX模型中均显示出强大的抗白血病活性。通过IL1RAP突变CAR-T细胞功能的完全丧失，证实了靶向特异性。IL1RAP-1XX CAR-T细胞在体外改善了T细胞的持久性，但在体内与IL1RAP CAR-T细胞相比未能显示出治疗优势。我们先前报道，白血病细胞生长抑制miR-142的生物合成，从而阻碍代谢转换并损害宿主T细胞的抗白血病活性；通过给予M-miR-142可以挽救这一现象。因此，我们假设白血病细胞对CAR-T细胞有类似影响，并且M-miR-142治疗可以挽救并增强IL1RAP CAR-T细胞的抗白血病活性。我们发现，接受M-miR-142和IL1RAP CAR-T治疗的CDX和PDX模型小鼠的生存期显著长于接受乱序寡核苷酸和IL1RAP CAR-T或突变CAR-T对照的小鼠（PDX中位生存期：78天 vs 51天 vs 24天）。 结论：我们确定了一种潜在的新策略，通过对抗白血病诱导的、由microRNA缺乏介导的免疫抑制机制，增强CAR-T细胞在AML中的持久性和疗效。