增生性糖尿病视网膜病变玻璃体液液体活检中外泌体miRNA谱分析

目的：增生性糖尿病视网膜病变（PDR）是糖尿病的一种严重微血管并发症。尽管外泌体参与多种病理过程，但其在眼部疾病中的作用尚不明确。本研究对PDR患者玻璃体液（VH）中的外泌体microRNA（exo-miRNA）进行表达谱分析，以阐明其在PDR发病机制中的调控作用。方法：收集23例PDR患者和17例非糖尿病对照者的VH样本。通过超速离心法分离外泌体，并采用透射电子显微镜、纳米颗粒追踪分析和Western blot进行鉴定。通过高通量测序鉴定差异表达miRNA（DEM），随后进行靶基因预测和生物信息学分析。使用实时定量聚合酶链反应（qRT-PCR）对关键DEM进行验证。结果：成功从VH样本中分离并鉴定了外泌体。测序分析共鉴定出843个独特miRNA，其中60个在PDR组与对照组间存在显著差异表达（28个上调，32个下调）。miR-451a和miR-486-5p上调最显著；miR-204-5p和miR-211-5p下调最显著。基因本体论和京都基因与基因组百科全书分析显示，DEM靶基因富集于内分泌、代谢、信号转导及细胞间黏附通路，特别是cGMP-PKG、mTOR和cAMP通路。网络分析确定miR-486-5p和miR-451a为关键枢纽基因。qRT-PCR验证结果证实了测序分析中的差异表达。结论：本研究首次提供了PDR患者玻璃体exo-miRNA的全面表达谱，识别了关键DEM及其潜在调控网络。这些发现表明玻璃体exo-miRNA，特别是miR-204-5p和miR-486-5p，有望成为PDR的诊断生物标志物和潜在治疗靶点。