酶解内界膜增强移植视网膜神经节细胞的存活

目的：在哺乳动物中，视网膜神经节细胞（RGCs）在损伤后缺乏再生能力，RGC移植是细胞替代疗法的潜在途径。然而，视网膜中的内界膜（ILM）是供体细胞整合的重要屏障，凸显了破坏它的策略的必要性。我们假设纤溶酶可以酶解ILM，从而增强移植供体RGC的存活。方法：在体内，对8至10周龄小鼠玻璃体腔注射磷酸盐缓冲液（PBS）或纤溶酶（2.3或4.6µg）。进行免疫组织学以验证ILM的破坏并评估小胶质细胞反应性和RGC存活。苏木精和伊红（H&E）染色用于评估玻璃体中的免疫细胞浸润，电生理用于评估视网膜功能，光学相干断层扫描用于评估视网膜结构。供体RGC通过将人胚胎干细胞分化为视网膜类器官（ROs）获得。在纤溶酶处理后2周，将RO来源的RGC移植到纤溶酶处理的眼睛中。使用tdTomato荧光鉴定移植的RGC。结果：我们的研究确定了纤溶酶的最佳剂量（2.3 µg），该剂量可有效破坏ILM，而不会触发小胶质细胞反应性或玻璃体中的免疫浸润。此外，纤溶酶处理后RGC数量和RGC功能均未受影响，而在纤溶酶处理的视网膜中观察到移植细胞的存活率提高。结论：我们的发现为纤溶酶介导的ILM破坏提供了转化性见解，证明最佳剂量可以有效降解小鼠ILM而不损害RGC完整性，为增强移植细胞的存活提供了一种有前景的策略。