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SRCAP-H2A.Z轴在细胞外信号调节激酶和mTOR信号下游维持皮肤表皮祖细胞
Skin Epidermal Progenitor Maintenance by the SRCAP-H2A.Z Axis Downstream to Extracellular Signal-Regulated Kinase and mTOR Signaling
摘要
表皮祖细胞功能对于维持皮肤表皮的持续更新至关重要。祖细胞如何整合来自其微环境的信号以维持功能尚不完全清楚。本研究探讨了组蛋白H2A变体H2A.Z及其调控其占位的ATP依赖性染色质重塑复合物的作用。我们发现H2A.Z的表达和染色质占位在角质形成细胞分化过程中显著降低。虽然已知两种染色质重塑因子负责沉积H2A.Z，但我们发现SRCAP对表皮祖细胞中H2A.Z的沉积至关重要，而EP400则非必需。H2A.Z的两种亚型H2AZ1和H2AZ2对祖细胞增殖均不可或缺，因为任一亚型的敲低都会诱导DNA损伤并导致核形态异常。尽管H2A.Z在分化过程中大幅减少，我们发现残留的H2A.Z和SRCAP仍持续维持分化角质形成细胞的核完整性。鉴于生长因子诱导的信号通路在祖细胞维持与分化中起关键调控作用，我们进行了靶向抑制剂筛选以探究这些通路是否影响H2A.Z。抑制细胞外信号调节激酶或mTOR信号通路会显著降低H2A.Z的染色质占位，并导致核形态畸变。本研究通过实例揭示了信号输入如何与染色质重塑相连接，从而支持表皮祖细胞的维持。
实验方法
产品清单
| 名称 | 品牌 | 货号 |
|---|---|---|
| 角质形成细胞无血清培养基 | Life Technologies | -- |
| 培养基154 | Life Technologies | -- |
| 达尔伯克改良伊格尔培养基 | Gibco | -- |
| Lipofectamine 3000转染试剂 | Invitrogen | -- |
| Quick-RNA小量提取试剂盒 | Zymo Research | -- |
| SuperScript VILO cDNA合成试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| PowerUp SYBR Green预混液 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| QuantStudio 3实时荧光定量PCR系统 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| NEBNext Ultra II定向RNA文库制备试剂盒（用于Illumina） | New England BioLabs | -- |
| NEBNext Poly(A) mRNA磁珠分离模块 | New England BioLabs | -- |
| Illumina HiSeq 4000测序仪 | Illumina | -- |
| Bioruptor Pico超声破碎仪 | Diagenode | -- |
| Protein G Dynabeads磁珠 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| ChIP DNA纯化与浓缩试剂盒 | Zymo Research | -- |
| Qubit dsDNA HS检测试剂盒 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| NEBNext Ultra II DNA文库制备试剂盒（用于Illumina） | New England BioLabs | -- |
| Ultima Investigator Plus显微镜系统 | Bruker | -- |
| MAI TAI HP可调谐激光器 | Spectra-Physics | -- |
| CFI60 Aprochromat ×40/0.8 WD NIR水镜物镜 | Nikon | -- |
| EVOS FL Auto 2显微镜 | Invitrogen | -- |
| M7000显微镜 | Thermo Fisher Scientific | -- |
| Matrigel基质胶 | Corning | 354234 |
| Li-COR Odyssey红外成像系统 | Li-COR | -- |