基于非超激动型CD28的双信号T细胞衔接器靶向KK-LC-1

背景：双特异性T细胞衔接器在血液系统恶性肿瘤和实体瘤中均显示出有前景的临床进展；然而，其治疗效果仍受到多种挑战的限制，包括仅通过CD3交联的单信号激活导致的T细胞失能。作为关键的共刺激分子，CD28通过与TCR介导的初级激活信号的协同作用增强T细胞功能，从而增强抗肿瘤功效。非超激动型CD28双特异性抗体在增强抗肿瘤功效的同时，可最大限度地减少全身毒性。北九州肺癌抗原-1（KK-LC-1）是一种在多种恶性肿瘤中过表达的癌-睾丸抗原，是肿瘤特异性免疫治疗的有前景的靶点。在此，开发一种靶向KK-LC-1的双信号T细胞衔接器策略，利用基于非超激动型CD28的共刺激机制，至关重要。方法：基于通过噬菌体展示技术成功获得靶向KK-LC-1和CD28的设计锚蛋白重复蛋白（KD=8.985 nM和7.43 nM），我们设计了两种T细胞衔接器（KK-LC-1×CD3和KK-LC-1×CD28）。通过表面等离子体共振、流式细胞术、共聚焦显微镜和体内成像验证了KK-LC-1设计锚蛋白重复蛋白的肿瘤特异性结合活性。然后，我们将其分别与CD3单链可变片段和CD28设计锚蛋白重复蛋白融合，构建两种T细胞衔接器。通过流式细胞术分析、共聚焦显微镜成像和生物发光定量，在体外和体内（n=5）系统评估了它们的生物活性和抗肿瘤功效。结果：成功构建了T细胞衔接器KK-LC-1×CD3和KK-LC-1×CD28，并显示出对KK-LC-1阳性肿瘤细胞和T细胞的高结合亲和力。与KK-LC-1×CD3单药治疗相比，这些衔接器的联合给药显著增强了T细胞活化和抗肿瘤功效（88% vs 66%，p<0.001）。在体内，与单药治疗相比，联合用药抑制了59.6%的肿瘤生长（p<0.05），并增强了肿瘤内CD8+浸润（5.4倍，p<0.001）和CD4+浸润（2.7倍，p<0.001），而联合PD-1×CTLA-4双特异性抗体的三联疗法将中位生存期从44天延长至48天（p<0.05）。结论：我们验证了靶向KK-LC-1的双信号T细胞衔接器策略治疗实体瘤的可行性，并证明其与PD-1×CTLA-4双特异性抗体联合在临床前研究中协同增强了抗肿瘤功效。关键词：双特异性T细胞衔接器 - BiTE，联合治疗，实体瘤