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北京达科为生物技术有限公司
入驻年限：7 年
- 联系人：
北京达科为
- 所在地区：
北京
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实验室仪器 / 设备、试剂、耗材、书籍 / 软件、细胞库 / 细胞培养、论文服务、医疗器械
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技术资料/正文
常见多功能型分离液的配置方法
1432 人阅读发布时间：2021-08-06 13:32
OptiPrep™是Serumwerk Bernburg AG的一款多功能分离液，Serumwerk Bernburg成立于1954年，是一家现代化的、专门的生产商和服务商。OptiPrep生产、包装、发布严格按照GMP和ISO13485标准执行。
OptiPrep
OptiPrep™是Serumwerk Bernburg AG的一款多功能分离液，其主要成分是60%碘克沙醇。密度为1.32 g/ml，可以用来分离多种种属、以及多种细胞、病毒、蛋白质、核酸等不同颗粒。OptiPrep不含多糖，对靶细胞无毒副作用，且内毒素含量＜0.13EU/ml,远低于欧洲标准（1EU/ml）。
配制不同密度的OptiPrep：
使用密度溶液的配制方法，是基于使用0.85% (w/v) NaCl, 10 mM Tricine-NaOH, pH 7.4作为细胞悬浮培养基。为了使溶液在任何梯度下都保持浓度恒定，首先将4体积的OptiPrep™与2体积的溶液A (3倍浓度的缓冲液) 混合，来制备40% (w/v)的碘克沙醇工作溶液(WS)。然后，使用溶液B进一步稀释碘克沙醇工作溶液，以获得适当密度的梯度溶液，常见的密度配制见表1。
注：HEPES/Tricine可以被其它有机缓冲液替代。如果溶液B中需要添加低浓度(1-2mM)的其它物质，如Mg2+或Ca2+，可以在溶液A也添加3-6 mM，以保持其在梯度中不变，如果不需要维持溶液恒定或二价阳离子浓度恒定，OptiPrep™可以直接用溶液B稀释(含有或不含低浓度的二价阳离子)，所获得的梯度溶液的密度和折射率与表1相比可能会有微小的差异，所有梯度溶液的渗透压都在285-305 mOsm范围内。
PS:使用等渗盐溶液和培养基配制、使用含血清的培养基配制方法请参考往期文章：
OptiPrep™的应用——不同密度梯度溶液的配制（关注下方“达科为生物城”公众号）
OptiPrep渗透压(约为290 mOsm/kgH2O)与血浆渗透压(约为300mOsm/kgH2O)相近,较少考虑平衡渗透压，在使用相同稀释溶液的情况下，分离液密度与碘克沙醇的百分比成正比。
Percoll
Percoll是一种包有乙烯吡咯烷酮——polyvinylpyrrolidone (PVP)的硅胶颗粒的水溶液。渗透压很低(<20mosm／kg H２O), 粘度也很小，密度为1.3g／ml左右。所以配置前要调整渗透压。
配制不同密度的Percoll:
Percoll具有非常低的渗透压(< 25mOsm /kg H2O)，配制不同Percoll时需要注意调整渗透压。将9份Percoll (v/v)加入1份1.5 M NaCl (v/v)或10倍浓度的细胞培养基中，制备等渗Percoll储存液（SIP，Percoll Stock Isotonic Percoll）。对于对离子敏感的亚细胞粒子，可以通过将9份Percoll (v/v)加入1份2.5 M蔗糖(v/v)来制备蓄积等渗Percoll (SIP)。
不同等渗溶剂配置的 Percoll 储存液具有不同密度
稀释储存液SIP以降低密度只需添加0.15 M NaCl（分离亚细胞颗粒或病毒时加入0.25 M蔗糖溶液），可将等渗Percoll（SIP）的溶液稀释至较低的密度进行分离细胞。以下公式可用于计算获得所需密度的溶液所需各组分的体积。
其中Vy =稀释用等渗溶剂的体积（mL）
Vi = SIP的体积（mL）
ρi = SIP的密度（g / mL）
ρy =稀释用等渗溶剂的密度（g / mL）
（0.15 M NaCl的浓度为1.0046 g / mL，0.25 M蔗糖的密度为1.032 g / mL）
ρ=最终溶液的密度（g / mL）
例如
要将55 mL的SIP稀释至1.07 g / mL的最终密度，计算所需的0.15 M NaCl量。
所需0.15 M NaCl的体积= 55×（1.123-1.07）/(1.07-1.0046)= 44.6ml
用等渗盐水或蔗糖溶液稀释Percoll储存液 (SIP)。ρ0是Percoll原液的密度
注意：百分比是Percoll储存液的体积占比
以0.15M NaCl作为等渗溶液稀释Percoll密度与百分比的对应表。（来源于网络仅供参考）
上面的公式可用于获得非常接近所需实际密度的密度。但是，轻微的稀释介质的体积 和密度的变化会影响最终密度。
OptiPrep VS Percoll配比参照表
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