多功能细胞分离液产品说明书

产品简介

多功能细胞分离液是一种密度梯度离心介质，由直径15–30 nm的胶体二氧化硅颗粒组成，颗粒表面包被单分子层聚乙烯吡咯烷酮（PVP），游离 PVP 含量仅为 1%–2%。

多功能细胞分离液特点为渗透压低（< 25 mOsm/kg）、粘度低（≤ 15 cP），可在低离心力（200–1000 g）下快速完成分离，条件温和，梯度可在 1.0–1.3 g/mL密度范围内形成，全程等渗稳定性好，能最大程度保留细胞活力与形态完整性。

本品基本无毒、几乎呈化学惰性、不粘附生物膜，是分离活细胞、亚细胞颗粒（沉降系数60S以上）和病毒的理想介质。

产品信息

参数	信息
产品组成	PVP 包被的胶体二氧化硅溶液
CAS 号	65455-52-9
颗粒直径	15–30 nm
密度	1.130 ± 0.005 g/mL
渗透压	< 25 mOsm/kg H₂O
粘度	≤ 15 cP（20°C）
电导率	< 100 mS/m
pH	8.5–9.5（20°C）
外观	无色至微黄色液体
储存条件	常温可稳定保存5年（强烈推荐2-8℃保存）
运输条件	常温运输
是否无菌	无菌

使用步骤

1.1 一步法稀释（直接配制目标工作液）：

（1）请根据目标分离组分选择目标工作液密度和体积，然后按照以下公式计算出配制目标工作液所需的多功能细胞分离液、稀释液和蒸馏水体积。

V₀=V×(ρ-0.1ρ₁₀-0.9)/(ρ₀-1)

V₀=未稀释多功能细胞分离液的体积(mL)；

V=目标工作液总体积(mL)；

ρ=目标工作液密度(g/mL)；

ρ₀=未稀释多功能细胞分离液的密度(1.130 g/mL)；

ρ₁₀=稀释液的密度(1.5 MNaCl溶液的密度约为1.058 g/mL；2.5 M蔗糖溶液的密度约为1.316 g/mL)。

（2）根据以上公式计算出V₀后，量取V/10的稀释液（1.5 M NaCl溶液或2.5 M蔗糖溶液），将多功能细胞分离液和稀释液充分混匀， 最后用蒸馏水补足至V即可。

1.2 两步法稀释（先配制等渗溶液，再稀释至目标工作液）：

（1）等渗溶液的配制：对于细胞样品，将多功能细胞分离液与1.5 MNaCl 溶液或10×PBS按照体积比9:1的比例进行混合配制。对于亚细胞颗粒或病毒样品，将多功能细胞分离液与2.5M蔗糖溶液按照体积比9:1的比例进行混合配制。

（2）请根据目标分离组分选择目标工作液密度和体积，然后按照以下公式计算出配制目标工作液所需的等渗溶液和稀释液的体积。细胞样本选用0.15 MNaCl溶液或 1×PBS稀释等渗溶液至所需密度；亚细胞颗粒或病毒样本则选用0.25 M蔗糖溶液稀释等渗溶液至所需密度。

ρ3=(9×ρ0+1×ρ10)/10

V3=V×(ρ–ρ2)/(ρ3–ρ2)

V2=V-V3

ρ₃=等渗溶液密度(g/mL)；

ρ₀=未稀释多功能细胞分离液的密度(1.130 g/mL)；

ρ=目标工作液密度(g/mL)；

ρ₁₀=等渗溶液稀释液密度(1.5 MNaCl溶液的密度约为1.058 g/mL；2.5M蔗糖溶液的密度约为1.316 g/mL)；

ρ₂=目标工作液稀释液密度(0.15 MNaCl溶液和0.25 M蔗糖溶液的密度约为1.00 g/mL)；

V₃=等渗溶液体积(mL)；

V=目标工作液体积(mL)；

V₂=目标工作液稀释液体积(mL)。

（3）依据上述公式算出 V3、V2，分别量取等渗溶液与稀释液，混匀后得到目标工作液。

1.3 预制密度梯度：遵循由高密度至低密度的顺序自下而上逐层铺液；使用吸头或注射器紧贴管壁操作，让液体缓慢自然流下，避免低密度上层溶液溅入高密度下层或渗入分层界面，成功构建密度梯度。

【备注】可预先采用 FBS 润洗管壁并去除多余血清，经该预处理后，分层加入的分离液能够沿管壁平稳流淌，易于形成清晰规整的液液界面。

注意事项

1. 为了确保操作人员的安全与健康，实验全过程请务必穿戴实验服并佩戴一次性手套。

2. 本品所附带的部分产品技术信息仅供客户参考、学术交流与科学研究之用；我司不对所提供信息的绝对权威性与完整性作担保。

3. 本品仅供科学研究使用，严禁用于临床诊断、治疗、食品及药品等任何人体相关用途，禁止存放于普通住宅。

4. 多功能细胞分离液 原液渗透压极低（< 25 mOsm/kg），不可直接用于细胞分离，使用前必须配制为等渗工作液。

5. 多功能细胞分离液 在 pH 低于 5.5 时可能发生凝胶化；二价阳离子（Ca²⁺、Mg²⁺）存在时凝胶化风险增加，高温会加剧该现象，因此使用时应规避这两种因素。

6. 高压灭菌仅适用于未添加盐或蔗糖的 多功能细胞分离液 原液（120°C，30 min）；盐会引起糊化，蔗糖会引起焦糖化。灭菌时尽量减少与空气接触（使用窄口瓶），如有颗粒形成可过滤或低速离心去除；如有明显蒸发，用无菌水补足体积以免影响密度。

7. -20°C 储存最多6 个月；冷冻后融化会形成梯度，使用前必须将瓶内液体充分混匀。

8. 本品强烈建议2-8 ℃保存，长期常温保存容易水分蒸发析出而改变产品密度等性质。

9. 预制梯度在无菌、无物理扰动条件下可保存数周而不改变梯度形状。

10. 本品不干扰流式细胞术和电子细胞计数仪检测。

11. 本品成分惰性、低毒，对细胞培养无明显损伤，原则上无需特意去除。若有清洗需求，可根据具体实验，用含2% BSA的D-Hank’s液或生理盐水等成分清洗2–3次后收集相应组分。

可能出现的问题及解决方案：

可能问题	可能原因	解决方法
细胞回收率低	加样体积过大/细胞浓度过高	减小加样体积；降低细胞浓度，分批分离
梯度界面不清晰	加液过快破坏界面 / 加减速过猛	用长针头沿管壁缓慢加液；离心机加减速调至最缓档
细胞活性下降	未调至等渗/渗透压偏离生理范围	用渗透压仪实测 SIP 渗透压并校正至 ~300–340 mOsm/kg
多功能细胞分离液凝胶化	pH < 5.5/二价阳离子存在/高温	保持 pH 5.5–10.0；避免 Ca²⁺、Mg²⁺；控制温度
分离液有水分析出	常温保存时间过长导致水分析出	建议长期保存于2-8 ℃条件下
高压灭菌后性状改变/失效	灭菌时混入了盐/蔗糖/二价阳离子	仅对未添加盐/蔗糖/二价阳离子的多功能细胞分离液原液灭菌（120 °C，30 min）
梯度形状不可重复	渗透压未实测校正/批间密度差异	每批实验前用渗透压仪和折光仪实测校正
下游检测背景高	多功能细胞分离液残留	添加缓冲液进行洗涤去除（2–3 次）；病毒/亚细胞颗粒用 100,000 g 高速离心去除