艾普迪 Cytospin涂片免疫染色在肿瘤生殖学领域的应用

       日常细胞病理技术工作中，脱落细胞离心涂片是查找肿瘤细胞的常规工作，但传统离心涂片法提取细胞沉淀较为分散，易造成肿瘤阳性细胞的检出率低，使用Cytospin离心技术不仅能更好富集目标细胞，而且还能保持细胞形态和结构的完整，进行后续细胞活检、特殊染色和免疫组化等实验；上一期与大家分享Cytospin系列涂片机在慢性呼吸道疾病研究领域的应用（点击查看），本期选择两篇肿瘤生殖学领域的相关研究，供大家学习交流。

背景

       高级别浆液性癌(HGSC)是最具有侵袭性的卵巢癌组织学亚型；约70%晚期患者初诊时已出现腹腔转移并伴有恶性腹水；本研究探讨细胞病理学鉴定腹水中HGSC免疫表型特征和BRCA1/2突变的准确性。

方法

       回顾性研究45例经组织学证实的原发性HGSC伴有恶性腹腔积液患者，将腹水离心（cytospin4）制备的细胞离心涂片和细胞块进行PAX8、WT1、P53、P16和Ki67免疫细胞化学法（ICC）染色，二代测序（NGS）用于检测腹水中胚系/体细胞BRCA1/2突变；细胞学ICC/NGS结果与原发肿瘤组织块的结果进行统计学比较分析。

结果

       PAX8、WT1、P53和P16的ICC/IHC结果显示在细胞离心涂片，细胞块和组织块之间有很好的可靠性(α> 0.75)，而Ki67表达的一致性差，腹水和组织块之间存在显著性差异(α< 0.26;p <0 .001，图1 )。

       腹水中检测到所有的胚系BRCA1/2突变，证实100%的一致性，但仅检测到14%的体细胞突变（表1）。

结论

       细胞病理学是鉴定腹水中HGSC免疫表型特征和检测中BRCA1/ 2胚系突变的准确方法，需要进一步的研究以评估腹水中HGSC的增殖活性和体细胞BRCA1/2突变。

02 KRT13在前列腺小管起始细胞中富集可鉴别发生骨转移的原发性前列腺肿瘤

背景

       良性前列腺小管起始细胞(TIC)和侵袭性前列腺癌表现出共同的生物特征，包括对低雄激素水平的耐受、凋亡抗性以及存在驱动上皮出芽和生长的微环境相互作用。通过Epcam、CD44和CD49f抗原谱， TIC细胞可以从包含前列腺组织的上皮细胞和基质细胞中分选出来。胎儿前列腺上皮细胞(FC)具有与成人TIC相似的抗原特征能诱导小管形成。本文研究成人前列腺组织中TIC定位来评估差异角蛋白(KRT)的表达。

方法

       收集14个成年/胎儿前列腺组织标本经组织消化培养后进行细胞分级和后续分析，包括Affymetri矩阵杂交分析、RT-PCR和Cytospin免疫染色；体内组织再生实验是将新鲜分离前列腺细胞皮下注射SCID-NODIL2γrNULL 小鼠6-24周后，取样处理包埋切片进行免疫组化染色分析；收集332名根治性前列腺癌手术标本制作成TMA进行免疫组化染色，评估KRT13的阳性表达比例及临床结果（疾病转移、生存率和复发等）之间的关系。

结果

       Affymetrix基因表达数据显示，KRT13在FC和TIC中表达是基底细胞(BC)和管腔细胞(LC)的4.07倍，差异有统计学差异(p<0.001)，RT-PCR和cytospin免疫染色也证实KRT13富集表达（图2）。

       免疫组织化学分析表达显示，KRT13丰富的表达见于发育不完全的导管/腺泡（胎儿前列腺）和索样结构（8周重组移植模型），但在良性的导管/腺泡（成年前列腺）和已分化小管（24周的重组移植模型）很难发现KRT13+阳性信号（图3）。

       前列腺TMA的免疫染色显示，约9%的病例中存在KRT13+肿瘤灶，该亚群的复发时间(p = 0.031)、转移时间(p = 0.032)和总生存率(p = 0.004)显著缩短。未经治疗的并发骨转移(临床分期M1期)的前列腺穿刺活检(PNBX)显示KRT13+肿瘤灶，骨转移灶也是如此。

结论

       KRT13在良性成年和胎儿前列腺组织以及重组移植物中的表达情况，以及KRT13在原发性和转移性前列腺癌中的表达频率表明，它可能是侵袭性肿瘤细胞中共同选择的干细胞/祖细胞样细胞状态的标志物。KRT13在良性干细胞样细胞中富集，表现出雄激素抵抗、抗凋亡和分支形态发生特性。总之，KRT13的表达与疾病进展的多个阶段的不良预后相关，可能成为前列腺癌预后不良的重要生物标志物。

1. Miceska S, Stegel V, Bebar S, Kloboves-Prevodnik V: Cytopathological assessment is an accurate method for identifying immunophenotypic features and BRCA1/2 mutations of high-grade serous carcinoma from ascites. Cancer Cytopathol 2023, 131(3):188-197.

2.  Liu S, Cadaneanu RM, Zhang B, Huo L, Lai K, Li X, Galet C, Grogan TR, Elashoff D, Freedland SJ et al: Keratin 13 Is Enriched in Prostate Tubule-Initiating Cells and May Identify Primary Prostate Tumors that Metastasize to the Bone. PLoS One 2016, 11(10):e0163232.