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畜牧兽医学报2025年5月刊“猪轮状病毒的分离鉴定及其致病性”文章分享
343 人阅读发布时间：2025-08-05 09:27
猪轮状病毒（PoRV）是引起猪腹泻的主要病原之一，可导致仔猪呕吐、厌食和腹泻等症状，尤其对1周龄以内仔猪影响严重，发病率可达80%，死亡率最高可达100%。近年来，PoRV在我国的检出率呈上升趋势，常与其他病原混合感染，导致仔猪病死率上升。本研究旨在分离与鉴定PoRV的流行毒株，分析其基因组序列的遗传变异以及病毒致病性，为了解PoRV的流行情况提供重要信息。
2025年5月24日《畜牧兽医学报》刊登了东北农业大学动物医学学院等单位的王亚楠、 郭雅茹、 姜艳平、 崔文、 李佳璇、 李一经、 王丽的文章“猪轮状病毒的分离鉴定及其致病性分析”。
# 该研究的创新点在于：
1. 流行毒株的分离与鉴定：
流行毒株的分离与鉴定：从黑龙江某猪场的腹泻仔猪中分离出一株可在体外培养的猪轮状病毒（PoRV）毒株HLJ/2021，为研究当前流行的PoRV提供了新的毒株资源。
2. 全基因组序列及遗传进化分析:
首次获得了该分离株的全基因组序列，通过与已发表的PoRV参考序列进行核苷酸同源性分析，明确其基因型，为理解PoRV的遗传变异和进化提供了重要数据。
3. 致病性分析：
系统评估HLJ/2021株对仔猪的致病性，包括临床症状、病理变化、排毒规律以及肠组织中病毒载量的动态变化，为PoRV的防控策略提供了科学依据。
病毒的鉴定
表1. 取分离株的细胞培养物,提取总RNA,反转录为cDNA,利用轮状病毒各段基因特异性引物进行PCR扩增
PoRV的分离培养
图1. 从15份病料中检测到2份PoRV阳性病料，不存在其他常见猪腹泻病原感染
图2. 将阳性病料处理后接种于MA104细胞，盲传至第三代时观察到细胞病变
PoRV的鉴定
图3. 间接免疫荧光试验显示，感染病毒的细胞中出现特异性荧光，对照组无荧光
图4. 透射电镜观察结果显示病毒粒子呈车轮状，直径约为65~75nm，符合轮状病毒的典型形态特征
PoRV全基因组测序及遗传进化分析
图5. 利用特异性引物进行PCR扩增，经琼脂糖凝胶电泳鉴定与预期大小相符
将HLJ/2021株的11段基因与GenBank中的参考序列进行核苷酸同源性分析，确定其基因型为G5-P[7]-I5-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1（表2，图6 ）
PoRV生长曲线的测定
图7. 结果显示，病毒在感染后迅速复制，于感染后66h达到最高滴度，为108TCID50/mL
感染仔猪临床症状
图8. 仔猪感染后48h开始出现腹泻症状，腹泻粪便呈水样，持续约48h后逐渐减轻，174h停止腹泻，192h内未出现死亡情况
感染仔猪病理变化
图9. 剖检结果显示，感染144h后的仔猪肠壁明显变薄，内容物呈水样，感染174、198h后的仔猪肠道与对照组无显著差异
感染仔猪的排毒情况及肠组织中病毒载量的测定
图10. qPCR结果显示，仔猪感染后60~90h开始排毒，138~174h逐渐停止排毒
图11. 不同肠段中病毒载量检测结果显示，回肠、盲肠、结肠和直肠中均可检测到PoRV，其中回肠中病毒载量最高，为 104.4RNA copies·μL-1
图12. 冰冻切片检测结果显示，PoRV阳性信号主要出现在回肠绒毛上皮细胞中
讨 论
PoRV是一种常见的腹泻病毒，能够造成仔猪腹泻、脱水甚至死亡。本研究分离的PoRV HLJ/2021株为G5-P[7]-I5-R1-C1-M1-A1-N1-T1-E1-H1型，感染可导致仔猪腹泻，对仔猪生产性能产生一定影响。PoRV在流行过程中，不同毒株之间的不同基因片段的交换是导致新型毒株出现的主要原因之一。该研究还发现，PoRV感染后可能会为其他病原如PEDV的感染提供条件，进而加剧猪场的疾病流行并致使仔猪死亡率升高。
结 论
该项研究成功分离了1株G5P[7]型PoRV毒株为HLJ/2021，该毒株对仔猪具有致病性，能够导致仔猪腹泻，对仔猪生产性能产生一定影响。
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