BMDM转染案例详解

BMDM，即骨髓来源巨噬细胞（Bone Marrow-Derived Macrophage），是一种从小鼠骨髓中分离并体外诱导分化的原代巨噬细胞。通常用于药物筛选或研究特定基因在巨噬细胞功能中的作用。然而在BMDM中进行转染并非易事。

 

由于BMDM是原代免疫细胞，增殖能力弱、极易被激活引发炎症，且胞内核酸酶丰富，会快速降解外源基因，往往导致常规方法转染效率极低。

 

Arcegen推出由新型多聚体高分子材料开发的升级版核酸转染试剂：Celthy SureXcel 3000（CAT#C130010），转染效率极高且细胞毒性极低，能够满足各种转染需求，包括BMDM等各类难转染细胞。

 

我们今天就来看下如何进行这个实验。

所需试剂

实验步骤

1.DNA转染

注：转染试剂使用量受细胞类型及其他实验条件影响，建议初次使用时设置梯度进行优化最佳使用量。
1） 细胞铺板，至转染操作时，以细胞融合度达70%-90%为佳。
2） 按照下表使用Opti-MEM培养基稀释转染试剂溶液，轻轻混匀。
3） 使用Opti-MEM培养基稀释DNA，得到DNA预混液，然后添加Enhancer转染增强剂溶液，轻轻混匀，得到稀释的DNA。
4） 将稀释的DNA加入已稀释的转染试剂溶液中(1:1比例)。
5） 室温孵育10-15分钟。
6） 将DNA-转染试剂复合物逐滴加到细胞中，轻轻混匀。

2.siRNA转染

转染siRNA操作与DNA的转染操作流程一样，但在稀释siRNA时则不需要加入Enhancer转染增强剂。

3.mRNA转染

转染mRNA操作及用量与DNA的转染操作流程一样，但在稀释mRNA时则不需要加入Enhancer转染增强剂。

不同细胞培养容器转染用量（仅供参考）：

【注】该表使用量仅供参考，DNA与转染试剂溶液具体使用量还需根据细胞类型及其他实验条件进行优化。

 

建议使用时比值保持在1:0.5-1:5之间。其中mRNA的用量及实验条件和DNA一致；若细胞比较脆弱，导致细胞死亡较多，可以通过将增强剂减半来获得更好的结果。

结果测试

使用绿色荧光蛋白（GFP）作为测试蛋白，通过荧光显微镜及流式细胞仪进行转染效果检测。我们使用C130010对BMDM细胞进行转染，得到了非常好的结果，明显优于竞品。

图 利用本试剂盒和竞品T*3000分别对BMDM进行DNA转染结果图