一叶知秋 | LLC基因敲除细胞：肺癌研究的“精准手术刀”

1. 细胞背景

Lewis肺癌细胞（Lewis Lung Carcinoma，LLC）作为经典的小鼠肺癌模型，因其高转移性和强侵袭性，广泛用于肿瘤微环境、转移机制及抗肿瘤药物开发研究。通过基因敲除技术靶向调控关键基因，可深度解析肿瘤发生机制并加速治疗策略优化。本文精选热门LLC基因敲除细胞株，助您抢占肿瘤研究前沿！

2. 细胞描述

物种：小鼠 

组织来源：肺癌；C57BL/6

细胞别称：LL/2；LL2；LLC1；LLC；Lewislungcarcinomaline1；Lewislungcarcinoma；Lewis-Lung；LewisLung

细胞形态：半贴半悬，贴壁部分圆形和梭形并存

细胞倍增时间：~24-36 hours

培养条件  

完全培养基成分：DMEM+10% FBS+1%P/S

培养环境：37℃、5%CO2

传代比例：1：2~1：3

传代频次：2~3 天传代一次

细胞形态图片

 

图1 LLC细胞参考正常形态图

LLC细胞特点

LLC细胞为贴壁悬浮混合型细胞，在细胞培养过程中，部分细胞贴壁生长，部分细胞悬浮生长。参考ATCC图片，贴壁细胞呈现出多角形或圆形，悬浮细胞则为圆形。常见的贴壁悬浮混合型细胞有LLC（小鼠Lewis肺癌细胞）、BV2（小鼠小胶质细胞）、RAW264.7(小鼠巨噬细胞）、PC3（人前列腺癌细胞）等。

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3. 细胞培养常见问题及处理方法

3.1 细胞不贴壁

如果是由于培养条件变化或培养基不适应等原因发生漂浮，导致细胞漂浮，应尽快给细胞换液，培养一段时间后可有效提高细胞贴壁率。

活细胞刚收到时，由于快递过程的剧烈摇晃会导致细胞不贴壁，若收货时细胞发生脱落漂浮，可以按照以下步骤处理：

（1）到货后不开瓶处理（尽量减少晃动）放培养箱静置4h。待细胞状态恢复后进行处理。

（2）收集瓶内培养基1200rpm，5min离心收集漂浮细胞。

（3）用完培轻轻吹起细胞沉淀（不要反复吹打），接种至新的T25培养瓶中。

（4）将瓶内贴壁的细胞进行消化处理，根据细胞的密度可考虑接种至新的T25培养瓶或合并至步骤3的培养瓶中

（5）24h后观察细胞状态，理论上会有大部分细胞贴壁，随着培养时间延长，细胞伸展开同时贴壁比例随之增加。如果48h后观察细胞仍然没有贴壁，可以测一下细胞活率，低于50%则重新复苏细胞。

复苏后的细胞，一般48h可以看到大部分细胞贴壁，随着培养时间延长，细胞伸展开同时贴壁比例随之增加。

 

图2 LLC细胞生长状态示例

4. LLC细胞基因敲除应用

4.1肿瘤转移研究的“金标准”：

LLC细胞易形成肺转移灶，模拟人类肺癌转移过程，是研究EMT（上皮-间质转化）和血管生成的理想模型。敲除特定基因可明确其在转移、耐药或免疫逃逸中的功能（如VEGF、PD-L1等）。

4.2药物开发的“试金石”：

敲除耐药相关基因（如MDR1、BCL-2），可筛选靶向药物并验证其敏感性。 敲除HIF-1α的LLC细胞对缺氧环境适应性下降，显著增强放疗效果（参考文献：Cancer Res, 2021）。  

4.3免疫治疗研究的桥梁：

构建免疫检查点基因敲除株（如PD-L1 KO），可评估CAR-T或PD-1抑制剂疗效。  

5. 粒曼LLC细胞基因敲除示例：