NEB限制性内切酶 --HF高保真酶、省时酶、Golden Gate 无缝克隆IIS内切酶

NEB限制性内切酶

--HF高保真酶、省时酶、Golden Gate 无缝克隆IIS内切酶

 

北京云肽生物科技代理美国进口NEB公司(New England Biolabs)限制性内切酶、缓冲液buffer、试剂盒等，提供业内更丰富的300种限制性内切酶，涵盖EcoRl、Xbal、BamHl等ll型限制性内切酶，以及Bsa1-HFv2、BsmBl-v2等IIS型限制性内切酶，并提供36种HF高保真限制性内切酶、180种省时限制性内切酶(省时酶，同时支持5min快切、过夜酶切)、210种使用通用bufer的限制性内切酶(方便双酶切)、以及GMP级别产品，大量用于生物实验的传统克隆、无缝克隆。甲基化分析、定点突变等应用，具备高活性、高批次间一致性，满足生命科学实验室基础研究、生物制药企业的广泛需求。

美国NEB公司自1975年起研发生产商品化的限制性内切酶，距今已有50年的历史，产品以高性能、高稳定性著称。NEB内切酶基本都采用基因工程重组法生产，重组内切酶活性高、纯度高、无其他酶污染，其高保真内切酶、省时酶等产品获得广大用户认可。

 

 

1、NEB HF高保真限制性内切酶

①低星号活性--通过基因工程改造，避免非特异性切割，具备更低的星号活性，酶切反应条件更加灵活;

②省时内切酶---高保真酶同时作为省时酶，支持5~15min快速酶切DNA，或过夜酶切，而不产生星号活性或DNA降解;

③方便双酶切--所有高保真内切酶在NEB rCutsmart通用缓冲液buffer中均保持100%酶切活性，方便双酶切操作;

④高纯度高一致性--严格质控，高纯度，消除核酸酶污染，酶切末端完整不被降解，具备高批次间一致性，高重现性;

⑤送上样染料--随高保真酶赠送6×紫色凝胶上样染料，消除电泳时染料的紫外阴影，含有SDS避免内切酶和DNA结合产生超大条带，改善电泳分析。

建议优先选择高保真内切酶，如没有合适位点，可选择NEB省时酶。

 

 

 

图.在高浓度条件，NEB EcoRl-HF 过夜酶切也不会产生星号活性。50μL反应体系中加入1μgLambdaDNA、图示不同浓度的酶以及相应的反应缓冲液，在37℃下过夜酶切。M为1kb DNA Laddere。

 

2、NEB省时酶

 

酶切时长灵活--提供超过180种省时限制性内切酶，支持5~15min快速酶切DNA，或过夜酶切，而不产生星号活性或DNA降解。

 

图.NEB Hindll-HF 能够在5分钟内完全酶切1μg DNA，也可用于过夜酶切，而不发生非特异性酶切或降解。M为Ikb DNA Ladder。

 

3、共用rCutSmart缓冲液的内切酶

ⓘ方便双酶切--提供超过210种统一使用NEB rCutSmart缓冲液的限制性内切酶，其在rCutSmart buffer 中具有100%活性，方便双酶切操作;

②简化实验流程--多种DNA修饰酶在rCutSmart缓冲液中具有100%活性，限制性内切酶处理后无需纯化样本，方便继续克隆，简化实验流程;

③减少酶吸附--rCutSmart buffer 包含重组蛋白，可防止内切酶粘附在反应管和移液吸头表面。

④送上样染料--大部分内切酶赠送6×紫色凝胶上样染料，消除电泳时染料的紫外阴影，含有SDS避免内切酶和DNA结合产生超大条带，改善电泳分析。

 

 

 

 

4、NEB无缝克隆用NEBridge Golden Gate 组装llS型内切酶

提供业内更丰富的50种llS型限制性内切酶，其中9种经Golden Gate组装(金门组装)验证，可用于≤52个DNA片段的无缝克隆。

①高组装效率--支持单管完成≤52个片段的复杂片段组装，具备非常高的组装效率，其中≤30个片段的组装效果更佳;

②兼容性强--支持高GC含量、高重复序列、<100bp片段、>15kb片段的组装;

③使用灵活-提供NEBridge Golden Gate 组装试剂盒、9种经Golden Gate 组装验证的llS型限制性内切酶、连接酶预混液(添加连接增强剂)、T4连接酶等丰富产品形式，供实验人员灵活选择。

 

④设计工具--提供GoldenGate.neb.com 在线设计软件，可以方便、快捷地进行Golden Gate 组装引物设计。

 

 

 

以llS型限制性内切酶Bsa1-HFv2为例，进行Golden Gate组装时，需要在dsDNA片段的两端加上其识别位点(GGTCTC)。酶切后，识别位点被移除，组装片段末端带有设计好的特定4碱基突出以指导组装。

 

 

 

 

对于包含12、24、35、52个片段的Golden Gate组装反应，显示了含有正确组装的菌落百分比。误差线为至少3个重复的标准差。以下几篇文献对此进行了报道:

1. Pryor, J.M., et al.(2022}ACS Synth. Biol. e0525

2. Pryor, J. M. et al. (2020).PLoS One,e8592

3. Potapov,V et al.(2018).ACS Synth.Biol,e0333