LUXCELL胎牛血清——Incucyte实时监测 FBS 支持下的细胞增殖表现

实验背景：

为系统评估胎牛血清（FBS）对细胞生长性能的支持能力，LUXCELL胎牛血清采用 Incucyte实时活细胞成像分析系统，对细胞在含胎牛血清培养条件下的增殖行为及连续传代过程进行动态监测。通过系统自带的软件对细胞汇合度（Confluence）进行定量分析，获得完整的细胞增殖曲线，从而直观反映细胞增殖速率和生长稳定性。同时，在连续传代培养过程中，持续监测细胞增殖趋势及生长一致性，用于评估胎牛血清在长期培养条件下对细胞活性和批次稳定性的支持效果。

我们联合苏州大学（剑桥-苏大基因组资源中心）、苏州市生物医药产业创新中心（核酸药物技术创新平台），选取了CHO（仓鼠卵巢细胞）、L929（小鼠成纤维细胞）、SP2/0（小鼠骨髓瘤细胞）、Vero（非洲绿猴肾细胞），能够代表生物制药、基础科研与质量控制、免疫学以及疫苗病毒生产等典型应用场景，同时也是ChP/USP提及的关键细胞系。分别使用LUXCELL胎牛血清、进口血清G进行复苏传代培养，通过Incucyte分析系统监测，获得细胞不同密度、连续传代的生长曲线，评估LUXCELL特优级胎牛血清的细胞生长支持能力。

实验方法：

1. 将待测细胞系用含不同血清的相应培养基复苏培养，至细胞汇合度约80%时，进行传代；

细胞传代两次后，传至96孔板内，（其中SP2/0为悬浮细胞，事先用多聚赖氨酸包被96孔板）分别以1*10⁴个/mL和2*10⁴个/mL密度接种，每组样3

1. 个复孔；

2. 事先在96孔板内加入培养基，然后每孔再加入上述两种密度的细胞混悬液，剩余未接种细胞孔位加入等体积的PBS，以减少细胞内培养基的蒸发；

3. （1）细胞生长曲线的测定  使用Incucyte分析系统，让细胞板静置 30 分钟，使得整板均匀升温至 37℃。用Cell-by-Cell 分析模块进行细胞汇合度计数并绘制细胞增殖曲线；

       （2）细胞倍增时间的测定  按细胞汇合度计算细胞的倍增时间。公式如下：倍增时间DT=Δt/ log₂ (C2/C1) ，其中DT为倍增时间，△t为细胞汇合度从C1增长到C2所经历的时间，C1和C2分别为初始时刻和经过时间△t后的细胞汇合度。

4. 连续传代测试  剩余细胞继续进行连续传代培养观察，每次传代以相同的细胞量进行传代并用Incucyte系统扫描。传代后，将细胞板放置于Incucyte分析系统中，每2-4小时扫描一次，扫描48h，然后再进行下一次传代与扫描。

 

结果与讨论：

测试选取的细胞系在复苏培养传代至第3代时，按不同密度接种于96孔板后持续培养，每个样本至少3个复孔。根据Incucyte分析系统绘制的曲线表明，LUXCELL品牌的特优级胎牛血清在CHO、L929、SP2/0、Vero细胞系中的增殖生长能力与阳性对照相当，甚至优于进口血清G。

 

图1  LUXCELL血清和进口血清G在不同密度CHO细胞中的增殖生长曲线对比，每组数据至少3个复孔；

图2  LUXCELL血清和进口血清G在不同密度L929细胞中的增殖生长曲线对比，每组数据至少3个复孔；

图3  LUXCELL血清和进口血清G在不同密度SP2/0细胞中的增殖生长曲线对比，每组数据至少3个复孔；

图4  LUXCELL血清和进口血清G在不同密度Vero细胞中的增殖生长曲线对比，每组数据至少3个复孔；

图5  LUXCELL血清和进口血清G在CHO、L929、SP2/0、Vero细胞倍增时间的对比。根据ChP细胞倍增时间的测定，Sp2/0细胞应不超过20小时；Vero细胞应不超过18小时；CHO细胞应不超过22小时。

图6  LUXCELL血清和进口血清G在CHO细胞中连续传代的生长曲线对比，每组数据至少3个复孔；

图7  LUXCELL血清和进口血清G在L929细胞中连续传代的生长曲线对比，每组数据至少3个复孔；

结论：

本次研究主要是对LUXCELL特优级胎牛血清、进口血清G进行了CHO、L929、SP2/0、Vero细胞增殖生长性能对比。结合 Incucyte分析系统的非侵入式实时监测优势，可有效减少人为操作误差，为胎牛血清质量评估、细胞培养体系优化提供可靠、可重复的数据支持。从结果上看，我们LUXCELL特优级胎牛血清在细胞增殖生长性能上与对照血清效果相当，甚至优于进口血清G。