高效液相色谱法（HPLC）的原理、分类、组成、应用及日常操作注意事项

高效液相色谱法（HPLC）具有高压、高效、高速、高灵敏度、高选择性等特点，广泛应用于医药、环保、石化、食品、化工等行业，是现在分离分析的重要方法，本文着重介绍HPLC的工作原理、基本组成及日常操作注意事项，使新学者快速了解高效液相色谱知识，在日常操作中理论与实践结合，确保HPLC的高效运行、快速分析。

基本原理

液相色谱根据分离机理的不同可分为：
液固吸附色谱
液液分配色谱
离子交换色谱
离子对色谱法
分子排阻色谱(或凝胶渗透色谱)

HPLC分类

按固定相和流动相的相对极性分为正相色谱(NormalPhaseChromatography)和反相色谱(Reversed Phase Chromatography)。
按分离过程的机理分为吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱和体积排除色谱。

HPLC组成

HPLC由溶剂输送系统（脱气机、高压泵等）、进样系统（定量泵、六通阀、定量环、进样针等）、分离系统（色谱柱等）、检测系统（检测器等）、记录及数据处理系统。

HPLC的应用

在环保方面，HPLC可以应用在：
(1)农药残留量分析 ：含氯农药 、有机磷 农药 、除虫菊等;
(2)致癌物质：硝基呋喃及其代谢物、霉素、亚硝胺、苯并芘等;
(3)水质分析：内分泌污染物等;
(4)其它……

在生化方面，HPLC可以应用于：
(1)蛋白质分析;
(2)肽类的分析;
(3)核酸;
(4)氨基酸 ;
(5)其它……

HPLC日常操作注意事项
选择流动相时应注意的几个问题：

尽量使用高纯度试剂作流动相，防止微量杂质长期累积损坏色谱柱和使检测器噪声增加。

避免流动相与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。

试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀并在柱中沉积。

流动相同时还应满足检测器的要求。当使用紫外检测器时，流动相不应有较强的紫外吸收，一般检测波长应大于流动相的截止波长。