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- 详细信息
- 文献和实验
- 技术资料
- 库存:
100
- 英文名:
/
- 保质期:
1年
- 供应商:
优利科(上海)生命科学有限公司
- 保存条件:
-20℃
- 规格:
50T
产品说明
产品组成(48 测试)
| 试剂 | 含量 |
| A-牛源-P | 20μL × 8 管× 6 排 |
| NG-P | 100μL × 2 支 |
| PG-牛源-P | 100μL × 1 支 |
ABI 7500、CFX 96、Mix 3005P、LineGene9600 等实时荧光 PCR 仪。
自备耗材和仪器
①冰盒;②移液器(0.5-10μL,10-100μL,100-1000μL)及配套灭菌吸头;③离心机;④涡旋混匀器;⑤金属浴。
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- 本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
- 第一区:样本制备区。
- 第二区:模板添加区。
- 第三区:扩增及产物分析区。
- 本试剂检测灵敏度高。为了防止污染,实验要分区操作。
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- 实验过程中穿戴工作服和乳胶手套,不同区域独立使用工具,需更换手套和实验服。
- 严格按照操作步骤操作,试剂配制和加样等步骤请严格按照说明书要求在冰盒上操作。
- 反应液中的成分对光敏感,应避光保存。试剂使用前要完全解冻,但应避免反复冻融,推荐使用前离心 30秒。
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- 反应结束后,扩增管请置于密封袋内丢弃,当日清理,开盖易造成气溶胶污染,禁止开盖。
- 不同批号试剂请勿混合使用,在有效期内使用。
参照《肉制品中动物源性成分的测定 实时荧光 PCR 法》或其他标准处理样品,制备的样本保存待用。
样品的采集和制备是动物源性鉴别的重要步骤,为防止交叉污染,应使用一次性消耗品,研钵应经 160℃干烤2 h,其他不宜干烤或高压处理的器皿应使用 1%次氯 钠溶液浸泡。
取样应尽量采取肌肉组织,对于同一批样品,应多点采集合并后,作为一份样品进行均质,提取 DNA。
采样过程应快速完成,将采取的样品迅速放入组织搅碎机中进行均质成糜状,充分混匀,取 0.1 g 充分混匀的样品,采用液氮研磨或均质器均质。
详细步骤请按照标准操作。
- 模板制备(样本制备区)
- 添加模板(模板添加区,放置于冰盒上进行)
- 扩增反应(扩增及产物分析区)
| PCR 循环 | 荧光收集位点 | |||
| 去污染 | 37℃ | 10 分钟 | 1 个循环 | — |
| 预变性 | 95℃ | 5 分钟 | 1 个循环 | — |
扩增 |
95℃ | 15 秒 | 40 个循环 | — |
| 60℃ | 60 秒 | ※ | ||
- 基线和阈值设定
结果判定
检测样品 Ct<30,曲线呈“S”型扩增曲线,可直接报告样品阳性,含有牛源性成分;
检测样品 30≤Ct≤35,需进行一次重复实验,若 Ct 值>35 则为阴性,或无典型曲线,不含有牛源性成分或含量低于检测限;否则为阳性,含有牛源性成分。
★ NG 反应为平滑直线,PG 反应为“S”型扩增曲线,此次检测结果有效,否则无效。如重复检测结果仍为无效,请与技术支持人员联系。
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文献和实验埃博拉病毒Z亚型核酸荧光PCR检测试剂盒 荧光探针PCR RNA 25T、48T 埃博拉病毒Z、S亚型双重核酸荧光PCR检测试剂盒 荧光探针PCR RNA 25
测量和鉴别非常微量的特异性核酸,从而可通过监测 CT 值而实现对原始目标基因的含量定量。实时荧光定量 PCR 法最大的优点是克服了终点 PCR 法进入平台期或叫饱和期后定量的较大误差,实现 DNA/RNA 的精确定量。 该技术不仅实现了对 DNA/RNA 模板的定量,而且具有灵敏度和特异性高、能实现多重反应、自动化程度高、无污染、实时和准确等特点,该技术在医学临床检验及临床医学研究方面有着重要的意义。 microRNA 实时荧光定量 PCR 的技术特点 虽然 microRNA 实时
光检测仪器透过PCR管壁能直接检测到荧光信号的波长和长度变化。 主要有以下优点: 1、探针特异性强,假阳性率低; 2、操作快速,不需要PCR后处理; 3、定量范围宽,HBV 0.4fg-4000fg/ml(102-106 Dane′s particle/ml); 4、闭管操作,PCR产物污染少; 5、灵敏度高。 主要方法有: 1、荧光探针法:进行荧光PCR检测时,要求荧光探针必须完全与靶基因互补,长度以20-30个碱基为宜,必要时3′端磷酸化封闭,以防在扩增时作为引物延伸。该方法利用Taq
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