CW2人结肠癌细胞复苏全攻略：从“冻眠”到“重生”的避坑指南

一、CW2细胞复苏培养标准化流程

材料准备：
37℃水浴锅、完全培养基（RPMI-1640 + 10% FBS）、离心机、无菌移液管、培养瓶、冻存管（含CW2细胞）、70%酒精棉片。

操作步骤：

1. 快速解冻

   • 从液氮罐/－80℃冰箱取出冻存管，立即浸入37℃水浴，轻柔摇晃至冰晶完全溶解（≤90秒）。
     ★避坑提示：解冻超时会导致细胞渗透压损伤！

2. DMSO去除

   • 酒精擦拭冻存管后移入超净台，将细胞悬液转移至含5mL预温培养基的15mL离心管。

   • 1000 rpm离心5分钟，弃上清。

3. 重悬与接种

   • 轻柔重悬细胞沉淀于2mL新鲜培养基，接种至T25培养瓶，补加3mL培养基。

   • 十字摇匀，置37℃、5% CO₂培养箱。

4. 首次换液

   • 24小时后全量更换培养基，去除死亡细胞碎片。

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二、关键避坑总结

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三、CW2细胞保藏与冻存规范

冻存步骤

1. 取对数生长期细胞，消化离心（1000 rpm, 5 min）

2. 用预冷冻存液（90% FBS + 10% DMSO）重悬至密度 5×10⁶/mL

3. 分装至冻存管（1.5mL/管），标注细胞名/代次/日期

4. 程序降温：

   • 4℃ 30 min → -20℃ 2 hr → -80℃ 过夜 → 液氮长期保存

*★关键点：禁止直接-80℃冻存！需使用程序降温盒（如CoolCell）防止冰晶损伤。*

保藏管理

• 液氮罐定期补液，保存位置记录双备份

• 每批次保留3管以上，主库/工作库分开储存

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四、CW2细胞的核心应用方向

1. 结肠癌机制研究：转移侵袭、耐药性（如5-FU耐药模型）

2. 抗癌药物筛选：化疗药/靶向药/天然产物药效评价

3. 基因功能研究：CRISPR-Cas9基因编辑验证靶点

4. PDX模型构建：免疫缺陷鼠体内成瘤实验

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