探秘未分化甲状腺癌：HTh-7细胞系——科研攻坚的利器与操作宝典

       在甲状腺癌研究领域，尤其是侵袭性强、预后极差的未分化甲状腺癌研究中，HTh-7细胞系扮演着至关重要的角色。作为源自人甲状腺未分化癌（间变性癌）的经典细胞模型，HTh-7为科学家们理解疾病机制、筛选潜在药物及探索新型疗法提供了宝贵的平台。智立中特(武汉)生物科技有限公司致力于为科研工作者提供高质量的细胞资源和技术支持，本文将全面介绍HTh-7细胞系，并详细阐述其复苏、消化、观察、保藏、冻存的关键步骤、特别注意事项以及广泛的应用价值。

一、 HTh-7细胞系简介

• 来源： HTh-7细胞系建立于1987年，来源于一位77岁女性患者的甲状腺未分化癌（间变性癌）组织。

• 特性：

  • 高度恶性： 代表最具侵袭性的甲状腺癌类型，生长迅速，转移潜能高。

  • 上皮来源： 具有上皮细胞特征。

  • 形态： 通常呈多角形或纺锤形，贴壁生长，但可能表现出一定的异质性，有时可见漂浮细胞或小集落。

  • 遗传背景： 携带TP53突变等与未分化甲状腺癌相关的典型遗传改变。

  • 应用核心： 是研究甲状腺癌去分化机制、耐药性、侵袭转移以及开发针对未分化癌新疗法的核心体外模型。

二、 HTh-7细胞的标准化操作流程

1. 复苏 (Reviving from Cryopreservation):

   • 准备： 提前预热完全培养基（如：DMEM/F12 + 10% FBS + 1% Penicillin/Streptomycin），37°C水浴锅预热。

   • 快速解冻： 从液氮或-80°C冰箱中取出冻存管，迅速（<1分钟）置于37°C水浴中，轻轻摇晃直至冰晶完全融化（约90%融化即可）。

   • 转移与稀释： 用70%酒精擦拭冻存管外壁。在生物安全柜内，将细胞悬液缓慢滴加到含有5-10ml预热完全培养基的离心管中（1:10稀释DMSO）。

   • 离心： 300-500 x g 离心5分钟。

   • 重悬与接种： 弃上清，用适量新鲜完全培养基轻柔重悬细胞沉淀。将细胞悬液接种到培养瓶/皿中，放入37°C, 5% CO2恒温恒湿培养箱。

   • 换液： 复苏后24小时左右，更换新鲜培养基，去除残留的DMSO和死细胞。

2. 消化 (Passaging/Subculturing):

   • 观察： 当细胞融合度达到80%-90%时进行传代。

   • 准备： 预热PBS、胰蛋白酶-EDTA消化液（常用0.05%胰酶+0.02% EDTA）、完全培养基。

   • 洗涤： 弃去旧培养基，用无菌PBS轻柔漂洗细胞1-2次，去除血清（抑制胰酶活性）。

   • 消化： 加入适量胰酶-EDTA溶液（覆盖瓶底即可），室温或37°C孵育。显微镜下密切观察，当细胞间隙增大、形态变圆、部分细胞开始漂浮时（通常1-3分钟），立即终止消化。

   • 终止： 加入2-3倍体积含血清的完全培养基，吹打瓶壁，中和胰酶活性。

   • 收集与离心： 将细胞悬液转移至离心管，300-500 x g 离心5分钟。

   • 重悬与接种： 弃上清，用新鲜完全培养基重悬细胞。根据需求按适当比例（如1:3至1:6）将细胞接种到新的培养器皿中。

3. 观察 (Observation & Monitoring):

   • 日常观察：

     • 形态： 使用倒置显微镜定期（每天或隔天）观察细胞形态（多角形/纺锤形）、密度、贴壁情况、是否有空泡或颗粒。

     • 生长状态： 评估细胞增殖速度、融合度。

     • 污染迹象： 至关重要！ 密切关注培养基是否浑浊、pH值是否异常变黄（变酸）、是否有真菌菌丝或细菌运动、不明漂浮物。一旦怀疑污染，立即隔离处理。

   • 细胞计数： 传代前或实验需要时，使用血球计数板或自动细胞计数仪进行细胞计数和活力检测（常用台盼蓝染色排除法）。

4. 保藏 (Maintenance):

   • 定期传代： 根据细胞生长速度（通常2-4天传代一次），在达到80%-90%融合度前及时传代，避免过度生长导致状态下降、接触抑制或漂浮死亡。

   • 培养基更换： 根据细胞密度和培养基颜色（pH指示剂酚红），每1-3天更换一次新鲜完全培养基。当培养基变黄（酸性）时需立即更换。

   • 环境稳定： 确保培养箱温度（37°C）、CO2浓度（5%）、湿度恒定。

5. 冻存 (Cryopreservation):

   • 时机： 选择对数生长期、状态良好的细胞（融合度80%左右）进行冻存。

   • 准备： 预热完全培养基，配制冻存液（通常为含10% DMSO的完全培养基，或商品化无血清冻存液）。预冷冻存管。

   • 消化与收集： 按标准消化步骤收集细胞。

   • 计数与配制悬液： 离心后弃上清，用配制好的冻存液重悬细胞至合适浓度（通常5x10⁶ 至 1x10⁷ cells/ml）。

   • 分装： 将细胞悬液分装至标记好的冻存管（1.0-1.5 ml/管），拧紧管盖。

   • 程序降温： 关键步骤！ 使用程序降温盒（内含异丙醇）或将冻存管置于泡沫盒/厚纸盒中放入-80°C冰箱过夜（约以1°C/min降温），然后迅速转移至液氮中长期保存。避免直接将细胞悬液放入-80°C或液氮！ 快速冷冻会产生致命冰晶。

三、 培养HTh-7细胞的特别注意事项总结

1. 生长速度与形态： HTh-7生长速度中等偏快，但相比某些永生化细胞可能稍慢。形态可能有一定异质性，需熟悉其正常形态以便识别异常。

2. 贴壁性： 贴壁能力较强，但过度消化或状态不佳时可能产生较多漂浮细胞。消化时间需精准控制。

3. 血清依赖性： 对血清质量要求较高，推荐使用优质胎牛血清（FBS）。

4. 无菌操作： 重中之重！ 未分化癌细胞可能相对脆弱，务必严格无菌操作，防止污染。培养基中常规添加抗生素（如1% Pen/Strep）。

5. 传代比例： 根据细胞生长状态调整传代比例（1:3至1:6常见），确保细胞有足够空间快速进入对数生长期，避免过度稀释导致生长停滞。

6. 观察频率： 建议每天观察，及时处理污染或状态不佳的情况。

7. 避免过度融合： 过度融合会导致细胞状态迅速下降，甚至大片脱落死亡，务必在80%-90%融合度时传代。

8. 冻存质量： 使用高质量的冻存液（如含DMSO的血清培养基或专用无血清冻存液）和程序降温是保证复苏后高存活率和状态的关键。记录冻存代数。

四、 HTh-7细胞的主要应用领域

作为未分化甲状腺癌研究的“金标准”模型之一，HTh-7细胞在以下方面具有广泛应用：

1. 甲状腺癌基础研究：

   • 未分化甲状腺癌的发生、发展及去分化机制研究。

   • 侵袭、迁移和转移机制探索（如上皮-间质转化EMT）。

   • 细胞信号通路（如MAPK, PI3K/AKT/mTOR, Wnt/β-catenin, JAK/STAT等）在高度恶性甲状腺癌中的作用。

   • 基因突变（如TP53, BRAF, RAS等）的功能研究。

2. 抗癌药物筛选与评价：

   • 化疗药敏感性/耐药性测试： 评估传统化疗药物（如多柔比星、紫杉醇）对HTh-7的效果及耐药机制。

   • 靶向治疗研究： 测试针对特定信号通路（如VEGFR, RET, BRAF, MEK, mTOR等）的靶向药物（如索拉非尼、乐伐替尼、维莫非尼、依维莫司等）的疗效及耐药机制。

   • 免疫治疗探索： 评估免疫检查点抑制剂（如PD-1/PD-L1抗体）或其他免疫疗法在体外模型中的潜力（常需共培养体系）。

   • 新型疗法开发： 测试基因治疗、溶瘤病毒、纳米药物、联合用药策略等的体外效果。

3. 放疗敏感性研究： 评估辐射对HTh-7细胞的杀伤效应及放射抵抗机制。

4. 肿瘤微环境研究： 研究与成纤维细胞、免疫细胞等共培养时，微环境对HTh-7细胞行为（增殖、侵袭、耐药）的影响。

5. 生物标志物发现： 通过组学技术（基因组、转录组、蛋白组）筛选与未分化甲状腺癌诊断、预后或治疗反应相关的潜在生物标志物。

6. 类器官模型构建： 作为构建更接近体内肿瘤结构的3D类器官或球体的种子细胞。

7. 基因编辑研究： 利用CRISPR/Cas9等技术在HTh-7中进行基因敲除、敲入或点突变，研究特定基因功能。

结语

        HTh-7人甲状腺未分化癌细胞系是攻克这一致命癌症不可或缺的研究工具。掌握其正确的复苏、培养、消化、观察、保藏和冻存技术，并牢记关键的注意事项，是确保实验数据可靠性和可重复性的基础。智立中特(武汉)生物科技有限公司将持续提供高质量的HTh-7细胞及相关技术支持，助力全球科研人员在甲状腺癌，特别是未分化癌的研究道路上不断取得突破，最终造福患者。