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天津舍为斯生物技术有限公司
入驻年限：1 年
- 联系人：
焦经理
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天津 滨海新区
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试剂、抗体、技术服务、耗材、论文服务、ELISA 试剂盒、细胞库 / 细胞培养、体外诊断
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科研机构 代理商
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技术资料/正文
双荧光素酶实验原理及应用解析
1221 人阅读发布时间：2023-04-04 14:19
一、简介：
1）定义：双荧光素酶报告基因检测是以荧光素（luciferin, 简称「Luc」）为底物来检测萤火虫荧光素酶（fireflyluciferase, 简称「F-Luc」）活性的一种报告系统。
2）检测原理：F-Luc 可以催化 Luc 氧化成 oxyluciferin，在 Luc 氧化的过程中，会发出生物荧光 (bioluminescence)。然后可以通过荧光检测仪测定 Luc 氧化过程中释放的荧光。
3）检测流程：
1）定义：双荧光素酶报告基因检测是以荧光素（luciferin, 简称「Luc」）为底物来检测萤火虫荧光素酶（fireflyluciferase, 简称「F-Luc」）活性的一种报告系统。
2）检测原理：F-Luc 可以催化 Luc 氧化成 oxyluciferin，在 Luc 氧化的过程中，会发出生物荧光 (bioluminescence)。然后可以通过荧光检测仪测定 Luc 氧化过程中释放的荧光。
3）检测流程：
4）技术优势：
a. 放大反应信号，灵敏度高，线性范围广；
b. 背景低，无内源信号干扰；
c. 具有内参报告基因调控，数据稳定。
5）应用领域：
a. 双荧光素酶实验验证-ceRNA 机制研究；
b. 双荧光素酶实验验证-转录因子与启动子调控机制研究；
c. 启动子活性分析；
d. 启动子/增强子 SNP 分析；
e. 信号通路激活验证；
f．RNA 修饰研究等。
二、服务内容
本公司在双荧光素酶实验验证 ceRNA 机制、转录因子与启动子调控机制方面有夯实的理论基础和丰富的实践经验。下面对这两个方面进行详细的阐述。
1. 双荧光素酶实验验证-ceRNA 机制
双荧光素酶报告基因实验是通过将预测能够与 miRNA 结合的靶基因 3』UTR 序列插入载体中 F-Luc 的 3』UTR。当我们感兴趣的 miRNA 和质粒中的插入序列结合后，miRNA 会通过和所插入的序列结合从而抑制萤火虫荧光蛋白的翻译最终造成荧光值的下降。海肾素荧光蛋白（renillaluciferase，简称「R-Luc」）可以作为内参来去除组间的转染效率差异。
a. 原理流程图：
a. 放大反应信号，灵敏度高，线性范围广；
b. 背景低，无内源信号干扰；
c. 具有内参报告基因调控，数据稳定。
5）应用领域：
a. 双荧光素酶实验验证-ceRNA 机制研究；
b. 双荧光素酶实验验证-转录因子与启动子调控机制研究；
c. 启动子活性分析；
d. 启动子/增强子 SNP 分析；
e. 信号通路激活验证；
f．RNA 修饰研究等。
二、服务内容
本公司在双荧光素酶实验验证 ceRNA 机制、转录因子与启动子调控机制方面有夯实的理论基础和丰富的实践经验。下面对这两个方面进行详细的阐述。
1. 双荧光素酶实验验证-ceRNA 机制
双荧光素酶报告基因实验是通过将预测能够与 miRNA 结合的靶基因 3』UTR 序列插入载体中 F-Luc 的 3』UTR。当我们感兴趣的 miRNA 和质粒中的插入序列结合后，miRNA 会通过和所插入的序列结合从而抑制萤火虫荧光蛋白的翻译最终造成荧光值的下降。海肾素荧光蛋白（renillaluciferase，简称「R-Luc」）可以作为内参来去除组间的转染效率差异。
a. 原理流程图：
1. 获取基因信息：确认基因 ID，明确互作关系，获取基因序列。
2. 靶基因结合在线预测服务：我们可以免费提供 miRNA 与靶基因，转录因子结合等在线数据库预测结果，并根据预测结果给出专业化建议。
3. 质粒的构建：根据预测的结合位点，我们可以为您设计实验方案，构建相应的野生型及突变型质粒，可直接用于细胞实验验证。
4. 专业的双荧光素酶结合验证实验服务：设置详细的分组，严格的复孔重复，选择稳定性一流的检测试剂，为您提供真实严谨的实验结果和数据分析。
2. 双荧光素酶实验验证-转录因子与启动子调控机制研究
转录因子是一种具有特殊结构、行使调控基因表达功能的蛋白质分子。某些转录因子仅与其靶启动子中的特异顺序结合，这些特异性的序列被称为顺式因子。转录因子的 DNA 结合域和顺式因子实现共价结合，从而对基因的表达起抑制或增强作用。双荧光素酶报告基因实验是检测这类转录因子和其靶启动子中的特异顺序结合的重要手段。
a. 原理流程图：
1. 转录因子结合位点预测：JASPAR: https://jaspar.genereg.net/。
2. 检测试剂的升级：E2920（均质法辉光型 (-Glo)）。
3. 数据分析：用归一化值消除实验差异带来的影响。
3. 宗旨理念
a. 实验过程及结果能够保证绝对真实，原始数据全部反馈给客户。
b. 实验过程全部有据可循，拍照留存，实验数据能够保证真实有效。