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技术资料/正文
荧光微球常见问题
944 人阅读发布时间：2024-07-08 15:44
1.在免疫层析实验中，选择哪种微球？粒径如何选择？
一般情况下，可以选择时间分辨荧光微球、绿色荧光微球、红色荧光微球、彩色微球
（红色、蓝色）、磁性微球。通常使用的微球粒径在100nm-400nm之间，其中常用的
是200nm和300nm粒径的微球。
2.在微球沉淀之后，使用超声重悬过程需要注意什么？
微球的分散可以使用水浴超声方式进行，这种方式可以有效的使微球分散但又不会使溶液发热，同时选择水浴超声的另一优势是不会像探头插入式超声那样因为使用次数的增多而导致探头污染的可能。
注意偶联有蛋白的微球如果超声时间过长，可能会出现基团脱落的情况。
3.稀释浓度较高的微球，一般使用的稀释液是什么？
一般使用去离子水稀释微球，当然也可以使用某些缓冲液，如偶联抗体前则可以选择
偶联缓冲液对微球进行稀释。
4.微球在免疫层析试纸条上流动性较差的原因是什么？如何改进？
微球流动性差的原因主要有：微球的粒径太大而试纸条孔径小、微球在缓冲液中发生聚集、微球的疏水键结合到膜的表面。
建议：使用更小粒径微球或更大孔径的试纸；添加表面活性剂提高微球的分散性；使用蛋白或表面活性剂将膜表面进行封闭从而减少其对免疫微球的粘性。
5.偶联抗体的微球在试纸上干燥后，如何让其被样本润湿后保持很好的流动性？
可以在膜上面点一些微球，干燥之前加入一些水或缓冲液使微球在膜上流动，如果不能够流动，表明这个膜上有阻碍。可以对膜进行预处理，可以有效的避免膜对抗体的吸附；另外，也可以在膜上添加一些非常亲水的物质如蔗糖，可以快速的再水化使微球释放完全，海藻糖等低聚糖也可以起到很好的效果。
6.蛋白标记荧光微球的较为合适蛋白量受哪些因素影响？
1）有效比表面积：粒径减小时，比表面积/mg微球值增加；
2）胶体稳定性：蛋白对胶乳有稳定和去稳定作用；
3）免疫反应：由免疫反应需要决定。
7.蛋白无法吸附到微球上？
加入更多的蛋白，去除微球中的表面活性剂，释放其占据的蛋白结合位点，引入中间物，将微球与蛋白相连，改变缓冲液。
8.标记时加入了大量的蛋白，但是仍然无活性，如何解决？
改变蛋白加入量，从而改变蛋白与微球结合的空间构象，使用表位稀释物，占据微球上的部分蛋白结合位点，防止蛋白靠的太近。
9.清洗去除未吸附蛋白后，微球发生聚集。
增加蛋白标记量或封闭剂的用量，防止有空余位点。
10.标记后开始活性很好，储存一段时间后，活性降低，如何改进？
降低储存温度到2~8度，降低储存液中的封闭剂浓度，防止抗体被替换，确认储存液中无能与抗体竞争的杂质，防止长时间取代抗体。
11.PS微球与蛋白（抗体）交联后，当时没发现有凝集，但隔夜后发现有凝集，什么原因？
偶联效率低。当体系蛋白不足或是其它原因，使微球表面在交联后还空出许多反应基团时，由于这些基团又可以与相连微球上的蛋白反应，结果是把球又拉在一起了，所以有聚集。可以加一些blocker agents解决，常见的是BSA，另外，也可提高微球的交联率。过一段时间后才出现凝集是因为微球偶联上蛋白后，相互之间由于携带同种电荷的关系，比较稳定（所以能以胶体样存在），只有当偶尔相互碰撞，遇上彼此的反应基团时才能结合。
12.抗体偶联至羧基PS球，即时检测效果很好，但置于37 ℃，2天后，抗体活性下降是为什么呢？
可能共价结合未成功，如果是这样，那么主要的原因是EDAC质量差或过期了。EDAC
长期放在空气中会吸潮，水汽会降低EDAC活性。另一个可能原因是凝集。观察胶乳是否有凝集产生。还有，交联蛋白前有没有清洗？我们提供的胶乳缓冲液中含有表面活性剂，可能干扰抗体的结合。如果未发生凝集，而且用前已经清洗，那么我们建议换新的EDAC。
13.EDC活化羧基乳胶微球后，加蛋白（抗体）即时有沉淀出现，是什么原因？
很多因素可以导致蛋白加入后，微球聚集成块。通常，蛋白偶联前的聚集与缓冲液（电解质）
有关。
一般情况下，可以选择时间分辨荧光微球、绿色荧光微球、红色荧光微球、彩色微球
（红色、蓝色）、磁性微球。通常使用的微球粒径在100nm-400nm之间，其中常用的
是200nm和300nm粒径的微球。
2.在微球沉淀之后，使用超声重悬过程需要注意什么？
微球的分散可以使用水浴超声方式进行，这种方式可以有效的使微球分散但又不会使溶液发热，同时选择水浴超声的另一优势是不会像探头插入式超声那样因为使用次数的增多而导致探头污染的可能。
注意偶联有蛋白的微球如果超声时间过长，可能会出现基团脱落的情况。
3.稀释浓度较高的微球，一般使用的稀释液是什么？
一般使用去离子水稀释微球，当然也可以使用某些缓冲液，如偶联抗体前则可以选择
偶联缓冲液对微球进行稀释。
4.微球在免疫层析试纸条上流动性较差的原因是什么？如何改进？
微球流动性差的原因主要有：微球的粒径太大而试纸条孔径小、微球在缓冲液中发生聚集、微球的疏水键结合到膜的表面。
建议：使用更小粒径微球或更大孔径的试纸；添加表面活性剂提高微球的分散性；使用蛋白或表面活性剂将膜表面进行封闭从而减少其对免疫微球的粘性。
5.偶联抗体的微球在试纸上干燥后，如何让其被样本润湿后保持很好的流动性？
可以在膜上面点一些微球，干燥之前加入一些水或缓冲液使微球在膜上流动，如果不能够流动，表明这个膜上有阻碍。可以对膜进行预处理，可以有效的避免膜对抗体的吸附；另外，也可以在膜上添加一些非常亲水的物质如蔗糖，可以快速的再水化使微球释放完全，海藻糖等低聚糖也可以起到很好的效果。
6.蛋白标记荧光微球的较为合适蛋白量受哪些因素影响？
1）有效比表面积：粒径减小时，比表面积/mg微球值增加；
2）胶体稳定性：蛋白对胶乳有稳定和去稳定作用；
3）免疫反应：由免疫反应需要决定。
7.蛋白无法吸附到微球上？
加入更多的蛋白，去除微球中的表面活性剂，释放其占据的蛋白结合位点，引入中间物，将微球与蛋白相连，改变缓冲液。
8.标记时加入了大量的蛋白，但是仍然无活性，如何解决？
改变蛋白加入量，从而改变蛋白与微球结合的空间构象，使用表位稀释物，占据微球上的部分蛋白结合位点，防止蛋白靠的太近。
9.清洗去除未吸附蛋白后，微球发生聚集。
增加蛋白标记量或封闭剂的用量，防止有空余位点。
10.标记后开始活性很好，储存一段时间后，活性降低，如何改进？
降低储存温度到2~8度，降低储存液中的封闭剂浓度，防止抗体被替换，确认储存液中无能与抗体竞争的杂质，防止长时间取代抗体。
11.PS微球与蛋白（抗体）交联后，当时没发现有凝集，但隔夜后发现有凝集，什么原因？
偶联效率低。当体系蛋白不足或是其它原因，使微球表面在交联后还空出许多反应基团时，由于这些基团又可以与相连微球上的蛋白反应，结果是把球又拉在一起了，所以有聚集。可以加一些blocker agents解决，常见的是BSA，另外，也可提高微球的交联率。过一段时间后才出现凝集是因为微球偶联上蛋白后，相互之间由于携带同种电荷的关系，比较稳定（所以能以胶体样存在），只有当偶尔相互碰撞，遇上彼此的反应基团时才能结合。
12.抗体偶联至羧基PS球，即时检测效果很好，但置于37 ℃，2天后，抗体活性下降是为什么呢？
可能共价结合未成功，如果是这样，那么主要的原因是EDAC质量差或过期了。EDAC
长期放在空气中会吸潮，水汽会降低EDAC活性。另一个可能原因是凝集。观察胶乳是否有凝集产生。还有，交联蛋白前有没有清洗？我们提供的胶乳缓冲液中含有表面活性剂，可能干扰抗体的结合。如果未发生凝集，而且用前已经清洗，那么我们建议换新的EDAC。
13.EDC活化羧基乳胶微球后，加蛋白（抗体）即时有沉淀出现，是什么原因？
很多因素可以导致蛋白加入后，微球聚集成块。通常，蛋白偶联前的聚集与缓冲液（电解质）
有关。