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细胞培养常见问题及解决(一)

151 人阅读发布时间:2023-09-04 11:07

细胞培养常见问题及其解决
1. 如何选用特殊细胞系培养基?
培养某一类型细胞没有固定的培养条件。在 MEM 中培养的细胞,很可能在 DMEM M199 中同样很
容易生长。总之,首选 MEM 做粘附细胞培养、RPMI-1640 做悬浮细胞培养是一个好的开始。
2. 何时须更换培养基?
视细胞生长密度而定, 或遵照细胞株基本数据上之更换时间,按时更换培养基即可。
3. 可否使用与原先培养条件不同之培养基?
不能。每一细胞株均有其特定使用且已适应之细胞培养基, 若骤然使用和原先提供之培养条件不同之
培养基, 细胞大都无法立即适应, 造成细胞无法存活。
4 可否使用与原先培养条件不同之血清种类?
不能。血清是细胞培养上一个极为重要的营养来源,所以血清的种类和品质对于细胞的生长会产生极
大的影响。来自不同物种的血清, 在一些物质或分子的量或内容物上都有所不同,血清使用错误常会
造成细胞无法存活。
5 何谓 FBS, FCS, CS, HS ?
FBS (fetal bovine serum) FCS (fetal calf serum) 是相同的意思, 两者都是指胎牛血清, FCS 乃错
误的使用字眼, 请不要再使用。CS (calf serum) 则是指小牛血清。HS (horseserum) 则是指马血清。
6 培养细胞时应使用 5 % 10% CO2?或根本没有影响?
一般培养基中大都使用 HCO3-/CO32-/H+ 作为 pH 的缓冲系统, 而培养基中 NaHCO3 的含量将决定
细胞培养时应使用的 CO2 浓度。当培养基中 NaHCO3 含量为每公升 3.7 g 时,细胞培养时应使用 10 %
CO2;当培养基中 NaHCO3 为每公升 1.5 g 时, 则应使用 5 % CO2 培养细胞。
7.Hank's 平衡盐溶液(HBS)要在空气中使用,不需要 CO2 培养箱。原因是什么?Hank's 平衡盐溶液
(HBS)Earle's 平衡盐溶液(EBS)有什么本质的功能差别?
HBS EBS 的主要差别在于碳酸氢钠的水平,Eagles (2.2g/L)中比在 Hanks (0.35g/L) 中高。碳酸氢
钠需用高水平的 CO2 平衡,以维持溶液的 PH 值。Eagles 液在空气水平的 CO2 中,溶液会变碱,Hanks
液在 CO2 培养箱中会变酸。如果希望在 CO2 培养箱中保存组织,需要用 Eagles 液,。如果仅仅是清洗
将要在细胞培养基中储存的组织,用 Hanks 液就可以了。
8. 细胞之接种密度为何?
依照细胞株基本数据上之接种密度或稀释分盘之比例接种即可。细胞数太少或稀释的太多亦是造成细
胞无法生长之一重要原因。
9. 悬浮性细胞应如何继代处理?一般仅需持续加入新鲜培养基于原培养角瓶中, 稀释细胞浓度即可, 若培养液太多时, 可将培养角
瓶口端稍微抬高, 直到无法容纳为止。分瓶时取出一部份含细胞之培养液至另一新的培养角瓶, 加
入新鲜培养基稀释至适当浓度, 重复前述步骤即可。
10.冷冻管应如何解冻?
取出冷冻管后, 须立即放入 37 °C 水槽中快速解冻, 轻摇冷冻管使其在 1 分钟内全部融化, 并注
意水面不可超过冷冻管盖沿, 否则易发生污染情形。另冷冻管由液氮桶中取出解冻时, 必须注意安
全, 预防冷冻管之爆裂。
资料格式:

细胞培养常见问题及其解决.pdf

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