5×蛋白上样缓冲液（无气味），从此告别“臭鸡蛋味”

做WB实验的人，大概都忘不了煮样时那股熟悉的“臭鸡蛋味”——那是DTT或β-巯基乙醇在加热后释放出的硫醇类化合物的味道。它不仅刺鼻难闻，而且挥发后飘散在整个实验室里，一闻就是一整天。更让人担心的是：DTT和β-巯基乙醇本身有毒，加热挥发后不仅危害实验人员的健康，长期暴露还可能影响实验结果的稳定性。

所以问题来了：那些号称“无气味”的5×蛋白上样缓冲液——用新型还原剂替代了DTT和β-巯基乙醇之后——还能不能把蛋白还原到位？条带还能不能跑得锐利？稳定性到底靠不靠谱？

传统上样缓冲液的气味问题，到底有多严重？

常规上样缓冲液的核心配方：SDS + 还原剂（DTT或β-巯基乙醇）+ 甘油 + 溴酚蓝 + Tris缓冲液。其中SDS负责给蛋白带上负电荷并破坏氢键，还原剂负责打断蛋白质分子间的二硫键，让蛋白亚基完全解聚。没有还原剂，多亚基蛋白在电泳中就无法以单体形式迁移，条带会乱成一团。

问题出在还原剂上：β-巯基乙醇（2-ME）：挥发性极强，有一股浓烈的硫磺/臭鸡蛋味，属于 hazardous 化学品。开盖后不断氧化，还原能力会逐渐下降；二硫苏糖醇（DTT）：气味同样刺鼻，虽然比β-巯基乙醇稳定一些，但价格更高，而且游离巯基可能干扰下游实验。

更关键的是——加热之后气味更猛。煮样时DTT和β-巯基乙醇大量释放到空气中，整个实验室弥漫着一股“煮臭鸡蛋”的味道，待久了嗓子不舒服、头也晕。无气味上样缓冲液的核心思路就是用一个替代方案来解决这个痛点。

（一）实验材料试剂准备：

猪肝蛋白样本、RIPA裂解液-JF5291、PMSF蛋白酶抑制剂-JS0249、5×蛋白上样缓冲液（无气味-JF1148、DTT-JF8405）、SDS-PAGE凝胶一步法配制试剂盒-JF0167、考马斯亮蓝染色液-JF3301、脱色液-JF3302。

（二）测试

1. 气味对决

在生物安全柜外，室温条件下，分别打开常规含DTT上样缓冲液和无气味上样缓冲液的管盖，由三位实验员盲评气味强度。

加热后气味对比（95℃，5分钟）：常规含DTT款：加热后气味急剧增强，整个通风橱范围内都能闻到浓烈的硫磺味，飘散范围约2-3米；无气味款：加热前后气味无变化，依然几乎无味。

结论：无气味款在常温开盖和加热条件下均无明显气味，彻底解决了DTT/β-巯基乙醇的刺鼻问题。

2. 还原效果对决

我们用猪肝脏组织裂解总蛋白上样（含大量二硫键丰富的复杂蛋白混合物），分别在SDS-PAGE凝胶上跑电泳，考马斯亮蓝染色液染色脱色后对比条带形态。

1号泳道为常规含DTT款，2号泳道为无气味蛋白上样缓冲液。

结果：用常规含DTT款蛋白上样缓冲液制备的蛋白样品跑胶，蛋白条带清晰锐利，边缘平整，高分子量区域条带分离良好；用无气味蛋白上样缓冲液制备的蛋白样品跑胶，条带清晰锐利程度与常规款无肉眼可见差异，高分子量蛋白条带同样分离良好。

结论：无气味款的还原效果与常规含DTT款基本一致，条带锐利平直，无明显差异。

（二）总结

无气味5×蛋白上样缓冲液在彻底解决DTT/β-巯基乙醇刺鼻气味问题的同时，在还原效果、条带质量、长期稳定性等核心性能指标上与常规产品基本一致。

本公司生产的5×蛋白上样缓冲液（无气味）使用了无气味、水溶性更稳定、还原能力相近的还原剂替代了有气味的二硫苏糖醇(DTT)或巯基乙醇(2-Mercaptoethanol)，从而可以确保本 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液在正常使用或加热时都不会有异味，使蛋白上样操作更加安全健康。

 

5×蛋白上样缓冲液（无气味）

【牌 号】JF1148

【产品简介】

5×SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液(无气味) (5×SDS-PAGE Protein Sample Loading Buffer, Odorless)，是一种经过改良的更加安全健康的无气味的以溴酚蓝为染料，5 倍浓缩的蛋白上样缓冲液。

本产品使用了无气味、水溶性更稳定、还原能力相近的还原剂替代了有气味的二硫苏糖醇(DTT)或巯基乙醇(2-Mercaptoethanol)，从而可以确保本 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液在正常使用或加热时都不会有异味，使蛋白上样操作更加安全健康。

本产品可以用于常规的 SDS-PAGE 蛋白样品的上样。除了没有异味外，本产品与常规 SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液的使用效果一致，未观察到有任何显著差异。

【产品图片】

【使用方法】

1. 将 5×SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液（无气味）与蛋白样品按照 1：4 的比例混匀。

注：5×SDS-PAGE 蛋白上样缓冲液（无气味）必须完全溶解后使用，加样前在室温或 37-40℃数分钟解冻后轻轻摇匀，以确保溶液混合均匀。

2. 将蛋白样品置于 95℃金属浴或水浴中加热 5-8 min，温度过高（如 100℃）或时间过长（如超过 15 min），有可能会导致蛋白降解或上样缓冲液中指示剂的颜色异常。

3. 待蛋白样品充分变性后冷却至室温，以小于 3000 rpm 的条件离心 30 s。

4. 离心后，以微量进样器取适量上清，直接加入 SDS-PAGE 凝胶加样孔内。

5. 进行常规电泳，通常染料到达距离凝胶底端 0.5-1 cm 处即可停止电泳。

【保存】 -20℃。

【有效期】18个月。