逆转录（reverse transcription），也被称为反转录，是一种在某些生命过程中自然发生的过程，其中DNA被用作模板来合成RNA。这与我们通常看到的DNA到RNA的转录过程相反，因此得名“逆转录”。这个过程需要逆转录酶，这是一种特殊的酶，能够读取DNA的信息，并将其转化为RNA。

逆转录实验步骤：
1、获得DNA模板：首先，需要获得含有要转录的DNA序列的模板。这可以通过提取样品中的DNA或从细胞中获取mRNA来实现。
2、合成互补DNA（cDNA）：然后，逆转录酶使用DNA模板合成cDNA。这个过程涉及到读取DNA的编码信息，并以之作为合成相应RNA的模板。
3、质量检测：合成后的cDNA需要通过一定的方法进行质量检测，以确保转录成功。常见的质量检测方法包括凝胶电泳和分子量测定等。
4、RNA的合成：一旦cDNA合成完成，就可以根据需要使用RNA聚合酶进行RNA的合成。

逆转录用途：
    逆转录技术在多个领域有广泛的应用。首先，在基因克隆和生物信息学中，逆转录是必需的步骤，用于从基因组DNA获取特定基因的cDNA。此外，逆转录技术也在研究基因表达、开发基因治疗策略以及病毒学等领域发挥着重要作用。

    在医学领域，逆转录技术被用于研究和诊断各种疾病，包括癌症、遗传疾病和病毒感染。在农业领域，逆转录技术也被用于研究植物基因的表达和调控。

   总的来说，逆转录是生命科学领域的一项关键技术，它帮助我们深入理解基因的表达和调控，同时也为疾病的治疗和预防提供了新的可能性。

注意事项：
1. 防止RNase污染：保持实验区域洁净；操作时需穿戴干净的手套、口罩；实验所用的离心管、枪头等耗材均需保证RNase-free。
2. 反应液的配制要在冰上操作完成，防止温度过高造成RNA降解。
3. cDNA保存时避免反复冻融。

结论：
    生命科学的探索如同破译一部复杂的剧本，而逆转录技术就是我们破译这部剧本的关键工具之一。通过逆转录，我们可以从DNA的视角去解读生命的奥秘，去探索生命的起源和进化。这个过程不仅增加了我们对生命的理解，也为医学和农业等领域的创新提供了可能。因此，理解和掌握逆转录技术对于生命科学的研究者来说至关重要。

常见问题：
1. 逆转录后的产物可以测浓度吗？
不建议测浓度，一般评估RNA模板的质量，需要从浓度、纯度及完整性三方面进行考量，但逆转录后的产物是一个混合体系，有cDNA、未完全逆转录的RNA、dNTP、残余的引物以及各种蛋白和盐离子等成分，会干扰cDNA的吸光度，因此不建议用逆转录后的cDNA来检测浓度与纯度。
2. 如何检测RNA逆转录成功与否？
1) 内参法：理论上，逆转录的cDNA是长度不同的DNA片段，所以电泳条带应该均匀分布在泳道上，如果RNA丰度低，电泳检测也可能无产物，这种情况通过PCR扩增内参基因，如果有扩增产物，cDNA的质量基本上可以保证(少数情况下：如目的基因片段过长，可能会有例外)。
2) 已知基因扩增法：如果有已知以此模板扩出来的基因，可以用此基因的引物验证。能扩增出内参，不一定就说明cDNA没有问题，因为内参在cDNA中丰度高，容易扩增。如果cDNA因为各种原因导致部分降解，则会大大影响低丰度的目的基因的PCR结果，而内参因为是高丰度基因，扩增很可能不受影响。
3. 逆转录产物中存在gDNA对后续qPCR实验有何影响？
当cDNA产物中混有gDNA时，cDNA和gDNA在qPCR反应时会被同时扩增，无法区分荧光信号是来自于cDNA还是gDNA，因此定量结果可能会存在偏差。特别是低表达量的基因，本身的扩增信号低，Ct值大，更加容易受到gDNA污染的影响。在逆转录的时候，加一步gDNA去除的步骤，能够有效降低gDNA污染的影响，增加实验的可信度。