上海西格生物科技有限公司
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大肠杆菌感受态细胞(E.coli DH5α)制备
人阅读 发布时间:2021-09-29 16:14
大肠杆菌感受态细胞(E.coli DH5α)制备
1、前夜接种受体菌(DH5或DH10B),挑取单菌落于LB培养基中37℃摇床培养过夜(约16小时);
2、取1ml过夜培养物转接于100ml LB培养基中,在37℃摇床上剧烈振荡培养约2.5-3小时(250-300rpm);
3、将0.1M CaCl2溶液置于冰上预冷;以下步骤需在超净工作台和冰上操作;
4、吸取1.5ml培养好的菌液至1.5ml离心管中,在冰上冷却10分钟;
5、4℃下3000 g冷冻离心5分钟;
6、弃去上清,加入100微升预冷0.1M CaCl2溶液,用移液枪轻轻上下吸动打匀,使细胞重新悬浮,在冰放置20分钟;
7 、4℃下3000 g冷冻离心5分钟;
8 、弃去上清,加入100微升预冷0.1M CaCl2溶液,用移液枪轻轻上下吸动打匀,使细胞重新悬浮;
9 、细胞悬浮液可立即用于转化实验或添加冷冻保护剂(15% - 20%甘油)后超低温冷冻贮存备用(-70℃)。