CFDA SE 细胞增殖与示踪检测试剂盒：精准标记与追踪细胞增殖全过程

CFDA SE 的关键特性与作用机制

CFDA SE 是一种功能强大的细胞示踪染料，广泛应用于细胞增殖研究。它通过被动运输进入活细胞，被胞内酯酶转化为荧光 CFSE，发出明亮绿光。CFSE 与细胞蛋白结合后稳定保留，随细胞分裂荧光均分，荧光强度减半，可用于识别不同分裂代次细胞。CFDA SE 标记非分裂细胞荧光稳定，可持续数月，非常适合细胞群落分析。其荧光均一性优于 PKH26，分裂后子代细胞荧光分配均衡，且能检测多达八次甚至更多细胞分裂。

操作步骤详解

细胞准备与处理

• 细胞选择与培养 ：依据研究目的挑选合适的细胞系，确保细胞状态良好，生长处于对数生长期，在相应培养基中培养并定期换液。
• 细胞计数与浓度调整 ：准确计数细胞后，调整浓度至实验所需范围，如 1×1051 \times 10^51×105 - 5×1065 \times 10^65×106 个 / mL，以保证标记效果和后续实验准确性。

CFDA SE 染料准备

• 染料配制 ：按试剂盒说明，将 CFDA SE 溶于无血清培养基或适当缓冲液，配制成工作液，浓度一般为 1 - 10 μM。根据细胞类型和实验需求优化浓度，避免浓度过高或过低影响标记效果。
• 染料预热 ：将配制好的染料工作液置于 37℃水浴中预热 5 - 10 分钟，以促进染料更好地穿透细胞膜，提高标记效率。

细胞标记过程

• 细胞与染料混合 ：将预热后的 CFDA SE 工作液与细胞悬液按一定比例混合，轻轻吹打混匀，使细胞与染料充分接触。通常 CFDA SE 与细胞的混合比例为 1:1 或根据实验需求调整。
• 标记孵育 ：将混合好的细胞与染料置于 37℃、5% CO₂ 的细胞培养箱中孵育 10 - 20 分钟，使 CFDA SE 充分进入细胞并被酯酶转化为 CFSE。孵育时间不宜过长，以免细胞因缺氧等原因提前凋亡或影响后续实验。

细胞洗涤与后续培养

• 洗涤去除未结合染料 ：孵育结束后，用预冷的含有血清的完全培养基洗涤细胞 2 - 3 次，以去除未结合的 CFDA SE 染料。洗涤过程中动作要轻柔，避免细胞聚集或损伤。
• 细胞重悬与培养 ：将洗涤后的细胞重悬于适量的完全培养基中，调整细胞浓度至合适范围，进行后续实验，如细胞增殖实验或细胞移植实验等。

结果检测与分析

流式细胞仪检测

• 仪器设置与参数调整 ：使用流式细胞仪检测细胞荧光强度，设置激发波长为 488 nm，检测绿色荧光（FL1 通道）。根据细胞荧光强度的不同，区分未分裂细胞和不同分裂代次的细胞。
• 数据采集与分析 ：采集荧光强度数据，通过流式细胞仪软件进行分析。根据荧光强度的分布，计算不同分裂代次细胞的比例，从而评估细胞的增殖情况。通常，未分裂细胞具有最高的荧光强度，每分裂一次荧光强度减半。

荧光显微镜观察

• 显微镜设置与观察 ：在荧光显微镜下观察细胞的荧光标记情况，使用激发波长为 488 - 500 nm 的蓝光激发细胞，观察细胞内绿色荧光的分布和强度。
• 图像拍摄与记录 ：拍摄细胞荧光图像，记录细胞的标记效果和增殖情况。通过图像分析软件对荧光强度进行半定量分析，进一步评估细胞增殖程度。