KTB1910-CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）与代谢组学技术联合应用于肿瘤能量代谢与氧化应激关联研究

KTB1910-CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）与代谢组学技术联合应用于肿瘤能量代谢与氧化应激关联研究

摘要：本研究创新性地将 CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）与代谢组学技术相结合，深入探究肿瘤细胞能量代谢与氧化应激之间的内在联系，揭示肿瘤细胞独特的代谢特征及氧化应激调控机制，为肿瘤治疗提供新的理论依据和潜在靶点。结果表明，联合技术能够全面解析肿瘤能量代谢与氧化应激关联网络，具有重要研究价值。

一、引言

肿瘤细胞的能量代谢重编程和氧化应激异常是肿瘤发生发展的两大重要特征。能量代谢的改变可影响肿瘤细胞内 ROS 的产生和清除，而氧化应激又可反过来调节肿瘤细胞的能量代谢途径。然而，传统研究方法难以全面揭示两者之间的复杂关联。CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）可准确测定肿瘤细胞 ROS 含量，代谢组学技术能全面分析细胞代谢物谱，两者联合有望为肿瘤能量代谢与氧化应激关联研究带来新突破。

二、材料与方法

（一）材料

CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）

多种肿瘤细胞系（如肝癌 HepG2 细胞、乳腺癌 MCF - 7 细胞）

代谢组学分析相关试剂与设备（液相色谱 - 质谱联用仪、气相色谱 - 质谱联用仪等）

细胞培养相关试剂与设备

荧光显微镜、流式细胞仪、酶标仪

（二）方法

细胞培养与处理：将肿瘤细胞培养至对数生长期，分别给予能量代谢抑制剂（如 2 - 脱氧葡萄糖抑制糖酵解、寡霉素抑制线粒体呼吸）、氧化应激调节剂（如 N - 乙酰半胱氨酸降低 ROS 水平、过氧化氢升高 ROS 水平）处理。

ROS 含量检测：按照 CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒操作步骤，在不同处理时间点收集细胞，加载荧光探针，利用荧光显微镜观察细胞内 ROS 荧光强度，通过流式细胞仪和酶标仪定量检测细胞内 ROS 含量。

代谢组学分析：收集处理后的细胞，提取细胞内代谢物，采用液相色谱 - 质谱联用仪或气相色谱 - 质谱联用仪进行代谢组学分析，鉴定和定量细胞内多种代谢物，包括糖代谢、脂代谢、氨基酸代谢等相关代谢物。

数据整合与分析：将 ROS 含量数据与代谢组学数据进行整合，通过生物信息学方法分析能量代谢途径与氧化应激之间的关联，构建肿瘤细胞能量代谢与氧化应激关联网络。

三、结果

（一）ROS 含量与能量代谢变化

能量代谢抑制剂处理后，肿瘤细胞 ROS 含量发生显著变化。2 - 脱氧葡萄糖抑制糖酵解后，HepG2 细胞 ROS 含量降低约 50%，同时细胞内糖代谢相关代谢物（如葡萄糖 - 6 - 磷酸、丙酮酸等）水平改变。寡霉素抑制线粒体呼吸后，MCF - 7 细胞 ROS 含量升高约 2 倍，脂代谢和氨基酸代谢相关代谢物也出现明显变化。

（二）能量代谢与氧化应激关联网络

通过代谢组学分析和数据整合，构建了肿瘤细胞能量代谢与氧化应激关联网络。结果显示，糖酵解途径产生的 NADPH 可参与 ROS 的清除，而线粒体呼吸链异常导致的 ROS 积累可反馈调节糖代谢、脂代谢和氨基酸代谢途径，影响肿瘤细胞的能量供应和生物合成。

四、讨论

本研究首次将 CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）与代谢组学技术联合应用于肿瘤能量代谢与氧化应激关联研究，成功揭示了两者之间复杂的相互作用机制。联合技术弥补了单一技术的局限性，为深入研究肿瘤代谢生物学提供了更全面的视角。但实验过程复杂，成本较高，对技术人员要求也较高。未来可进一步优化实验流程，降低成本，推动该联合技术在肿瘤研究中的广泛应用。

五、结论

CheKine™ 活性氧（ROS）含量检测试剂盒（荧光法）与代谢组学技术联合应用在肿瘤能量代谢与氧化应激关联研究中具有巨大潜力，有助于揭示肿瘤发生发展的新机制，为肿瘤精准治疗策略制定提供理论支持。

技术支持

亚科因（武汉）生物技术有限公司

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