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江西博领生物技术有限公司
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江西博领生物技术有限公司
入驻年限：7 年
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周经理
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江西 赣州市 章贡区
- 业务范围：
试剂、实验室仪器 / 设备、耗材、ELISA 试剂盒、技术服务、医疗器械、体外诊断
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生产厂商
技术资料/正文
3D细胞利用静电场原理制备技术
135 人阅读发布时间：2021-01-26 15:59
以博领生物自主研发设备三维微球制备仪为例，制备直径为300微米的细胞微球步骤如下：
1. 操作步骤
1.1 将1×105-1× 107个细胞与0.9%浓度的0.5-2 mL海藻酸钠溶液蜗旋混合1分钟。
1.2 用10 mL无菌注射器吸取离心管中的细胞和海藻酸钠混合液，吸的时候注意尽量排尽管内的空气（可以静置一段时间方便排除空气）。
1.3 注射器安装25G尺寸（或其他尺寸）铁针头，固定在注射泵上。
1.4 在2-10 mL的微球生成管中加入1-9 mL 1.1%浓度的CaCl2溶液。将微球生成管放置在升降台上，调节升降台，使得针头与液面距离为1~2 cm左右。
1.5 将三维细胞微球制备仪上的正极铁夹夹在注射泵的25G尺寸（或其他尺寸）铁针头上，负极铁夹夹在烧杯中的线圈上。
1.6 打开三维微组织制备仪电源
1.7 打开三维微组织制备仪的脉冲低压开关,设置脉冲电压30 -35 V，频率120 Hz，脉宽4-5 ms；打开注射泵电源，设置速度为2.0-2.5 mm/min，启动注射泵，让海藻酸钠细胞悬浮液成线性流入氯化钙溶液中，直至全部液体注入。
1.8 关闭脉冲低压开关，关闭设备电源。在800 rpm/min离心收集制备获得三维细胞微球（300 μm左右），去除上清，加入不含血清的培养基润洗2次，最后加入到含血清的培养基中，用于进一步培养及药敏测试。
2 参数设置
2.1速度参数设置（速度可调范围为1.364 -13.64 μL/min，按10 mL注射器算）：
本设备速度参数定义：是指注射泵里面的海藻酸钠细胞悬浮液出注射泵的瞬时速度，当设置速度变小时，将使得三维细胞微球大小偏大，反之，当速度变大时，三维细胞微球大小偏小。速度大小并不是决定三维微球的唯一参数，不同种类的细胞速度过快或者过慢都会导致三维细胞微球形态上的变化。
2.2电压参数设置（30-45 v可调）：
本设备电压参数定义：是指低压脉冲电源输出的电压值，当设置电压变小时，将使得三维细胞微球大小偏大，反之，当电压变大时，三维细胞微球大小偏小。电压大小并不是决定三维微球的唯一参数，低压脉冲电源输出的电压过高或者过低都会导致三维细胞微球形态上的变化。
1. 操作步骤
1.1 将1×105-1× 107个细胞与0.9%浓度的0.5-2 mL海藻酸钠溶液蜗旋混合1分钟。
1.2 用10 mL无菌注射器吸取离心管中的细胞和海藻酸钠混合液，吸的时候注意尽量排尽管内的空气（可以静置一段时间方便排除空气）。
1.3 注射器安装25G尺寸（或其他尺寸）铁针头，固定在注射泵上。
1.4 在2-10 mL的微球生成管中加入1-9 mL 1.1%浓度的CaCl2溶液。将微球生成管放置在升降台上，调节升降台，使得针头与液面距离为1~2 cm左右。
1.5 将三维细胞微球制备仪上的正极铁夹夹在注射泵的25G尺寸（或其他尺寸）铁针头上，负极铁夹夹在烧杯中的线圈上。
1.6 打开三维微组织制备仪电源
1.7 打开三维微组织制备仪的脉冲低压开关,设置脉冲电压30 -35 V，频率120 Hz，脉宽4-5 ms；打开注射泵电源，设置速度为2.0-2.5 mm/min，启动注射泵，让海藻酸钠细胞悬浮液成线性流入氯化钙溶液中，直至全部液体注入。
1.8 关闭脉冲低压开关，关闭设备电源。在800 rpm/min离心收集制备获得三维细胞微球（300 μm左右），去除上清，加入不含血清的培养基润洗2次，最后加入到含血清的培养基中，用于进一步培养及药敏测试。
2 参数设置
2.1速度参数设置（速度可调范围为1.364 -13.64 μL/min，按10 mL注射器算）：
本设备速度参数定义：是指注射泵里面的海藻酸钠细胞悬浮液出注射泵的瞬时速度，当设置速度变小时，将使得三维细胞微球大小偏大，反之，当速度变大时，三维细胞微球大小偏小。速度大小并不是决定三维微球的唯一参数，不同种类的细胞速度过快或者过慢都会导致三维细胞微球形态上的变化。
2.2电压参数设置（30-45 v可调）：
本设备电压参数定义：是指低压脉冲电源输出的电压值，当设置电压变小时，将使得三维细胞微球大小偏大，反之，当电压变大时，三维细胞微球大小偏小。电压大小并不是决定三维微球的唯一参数，低压脉冲电源输出的电压过高或者过低都会导致三维细胞微球形态上的变化。