抗原设计攻略
991 人阅读发布时间:2021-08-12 17:21
想要以高成功率获取特异性好、有效性高的抗体,第一步抗原设计至关重要。
目前,用于免疫生产抗体的抗原一般有多肽抗原和重组抗原。两种抗原各有优劣,多肽抗原理论上来说可以产生高特异性、针对特定抗原表位的抗体;缺点是免疫原性较低,需要和载体偶联以增强免疫原性,这增加了抗原制备成本,另外还会产生大量针对载体的非特异性抗体,增加了后续纯化和筛选成本。重组抗原免疫原性强,包含抗原表位多,用于制备抗体,相对成功率较高;但有也缺点,重组抗原一般采用大肠杆菌表达系统,原核表达系统的蛋白质折叠方式与真核生物的有所差异,另外有时并不能获取可溶性的抗原,进一步导致所获抗原与目的蛋白抗原的抗原表位并不完全一致,从而产生出一些非特异性的抗体,而这些非特异抗体在后期的纯化过程中是很难被排除掉的。
设计抗原时,多肽抗原一般选择10~20个左右的氨基酸,重组抗原一般为长度在100个氨基酸以上的部分或者全长蛋白。无论选择设计哪一种抗原,我们都要遵循以下几个基本原则:
1. 确定所需生产抗体的用途
明确所需生产抗体的用途对抗原设计有很大的影响。例如:如果需要利用得到的抗体来研究目的蛋白的特定区域,如C端或N端,那么抗原序列的选择就应集中在这一区域;如果想要用抗体来研究一种特定状态下的蛋白,如磷酸化等,抗原设计的选择性更小了,只有选择该位点附近的合适氨基酸序列来设计多肽抗原。