【笃玛实验科普-260017】新手必看！Bradford法测蛋白浓度攻略

做蛋白定量实验，Bradford法是最常用的方法之一。今天用最简单的方式讲清楚它的原理和操作步骤

 

 

原理速懂（记住颜色变化就行）

在酸性溶液中，考马斯亮蓝G250染料会与蛋白质结合（主要是碱性氨基酸和芳香族氨基酸）。

结合前：染料呈棕红色，最大吸收峰在488 nm

结合后：染料变成蓝色，最大吸收峰移动到595 nm

重点：结合上去的染料量与蛋白质带的正电荷数成正比。

颜色越深 → 蛋白质越多

操作步骤（3步搞定）

配制工作溶液（考马斯亮蓝染液）→加入蛋白样品，混匀，室温静置5-10分钟→在595 nm处测吸光度，根据标准曲线算出浓度

 

小贴士

①标准曲线一定要做，用BSA（牛血清白蛋白）作为标准品

②比色皿或酶标板都可以测

③注意：去垢剂（如SDS）会干扰结果，样品尽量不含

总结：棕红变蓝，颜色越深蛋白越多。简单快速，新手友好

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