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上海达为科生物科技有限公司
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上海 宝山区
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细胞库 / 细胞培养、论文服务、试剂、实验室仪器 / 设备、技术服务、医疗器械、耗材
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生产厂商 经销商 代理商 科研机构
技术资料/正文
新生小鼠原代心肌成纤维细胞的分离与培养
342 人阅读发布时间：2024-03-28 14:57
1. 准备0-1天内的C57BL/6J小鼠新生鼠。
2. 用温的无菌去离子水，轻轻擦拭每只新生鼠。
3. 用70%的乙醇彻底去除新生鼠身体上的污染物。
4. 断头，取心脏，心脏置于冰的PBSG溶液中。
5. 除去血液和非心脏组织。
6. 剪碎心脏组织。
7. 加入胰酶-胶原酶消化液，每只新生鼠75ul。
8. 在37°C的摇床培养箱中，以250 rpm/ 5 min，消化心肌组织。
9. 轻轻涡旋，然后离心10秒，丢弃第一次消化的上清液。
10. 开始第二次消化，250 rpm/ 5 min后，轻轻涡旋，然后离心10秒，收集上清液到2倍体积的胎牛血清中。
11. 重复上述消化过程，共进行8次消化，收集细胞悬液。
12. 使用没有包被的10cm大皿，预种植细胞1h。
13. 1小时后，将培养皿从培养箱中取出，移除没贴壁的细胞及上清液，加入完全培养基继续培养。
2. 用温的无菌去离子水，轻轻擦拭每只新生鼠。
3. 用70%的乙醇彻底去除新生鼠身体上的污染物。
4. 断头，取心脏，心脏置于冰的PBSG溶液中。
5. 除去血液和非心脏组织。
6. 剪碎心脏组织。
7. 加入胰酶-胶原酶消化液，每只新生鼠75ul。
8. 在37°C的摇床培养箱中，以250 rpm/ 5 min，消化心肌组织。
9. 轻轻涡旋，然后离心10秒，丢弃第一次消化的上清液。
10. 开始第二次消化，250 rpm/ 5 min后，轻轻涡旋，然后离心10秒，收集上清液到2倍体积的胎牛血清中。
11. 重复上述消化过程，共进行8次消化，收集细胞悬液。
12. 使用没有包被的10cm大皿，预种植细胞1h。
13. 1小时后，将培养皿从培养箱中取出，移除没贴壁的细胞及上清液，加入完全培养基继续培养。