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上海达为科生物科技有限公司
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上海达为科生物科技有限公司
入驻年限：6 年
- 联系人：
张经理
- 所在地区：
上海 宝山区
- 业务范围：
细胞库 / 细胞培养、论文服务、试剂、实验室仪器 / 设备、技术服务、医疗器械、耗材
- 经营模式：
生产厂商 经销商 代理商 科研机构
技术资料/正文
成年小鼠关节软骨细胞原代培养
82 人阅读发布时间：2024-03-28 14:30
- C57小鼠，8-10周，通过颈椎脱位处死，浸入75%乙醇浸泡5分钟，转移到通风柜中的解剖盘中。
- 使用眼科剪和镊子，使髋关节脱臼，保持股骨头完整。
- 用止血钳去除每个股骨头的软骨帽，将组织放入含2%双抗的PBS中。
- 用冰冷的含2%双抗的PBS清洗2-3遍，将关节软骨小心移到2ml离心管中。
- 用眼科剪刀将软骨帽剪成约1mm3的碎片，加入3ml预热的Collagenase D（1.5mg/ml）。
- 放入37℃、80rpm的摇床中进行第一次消化，时间2h 。
- 第一次消化结束后，加入含血清的培养基终止消化，40um的细胞筛过滤后，离心1500rpm，2min。
- 沉淀用DMEM完全培养基重悬，计数，种植在24孔板中。
- 在未消化的组织中加入3ml预热的Collagenase D，放入37℃、80rpm的摇床中进行第二次消化，时间2h，然后收集细胞。
