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百萤问号-你知道免疫细胞化学中的常用固定剂怎么配制吗？(一）
248 人阅读发布时间：2024-03-18 09:08
今天，百萤为大家介绍一下免疫细胞化学中几种常用固定剂的配制方法，还不会的小伙伴，请好好收藏哦！大多数神经激素、肽类物质为水溶性，在用于免疫细胞化学研究之前，常需固定。但肽类和蛋白质的物理、化学性质不同，因而对不同的固定方法或固定剂的反应也不尽相同。某些固定剂甚至可同时破坏和/或保护同一抗原的不同抗原决定簇。因此，在进行免疫细胞化学研究之前，很有必要了解所要研究的物质（蛋白质或肽类）的化学性质，并根据需要来选择适宜的固定剂（或固定方法）以及改进固定条件。
目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。
1、4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）
配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500~800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2~24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
2、4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠
试剂：
A液：
B液：
C液：
配制方法：A液好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2~7.4，后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%~1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定剂中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
3、Bouin's液及改良Bouin’s液
试剂：饱和苦味酸
配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸好在临用前加入。改良Bouin‘s液即不加冰醋酸。
该固定剂为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸（pH为3~3.5），对抗原有一定损害，且组织收缩较明显，故不适于组织标本的长期保存。此外，操作时，应避免吸入或与皮肤接触。
目前，免疫细胞化学研究中常用的固定剂仍为醛类固定剂，其中以甲醛类和戊二醛为常用。在此，简要介绍几种目前较为常用和推荐的固定剂，以供读者选用。
1、4%多聚甲醛-0.1mol/L磷酸缓冲液（pH7.3）
| 多聚甲醛 | 40g |
| 0.1mol/L磷酸缓冲液 | 至1000ml |
配制方法：称取40g多聚甲醛，置于三角烧瓶中，加入500~800ml 0.1mol/L磷酸缓冲液（Phosphate Buffer以下简称PB），加热至60℃左右，持续搅拌（或磁力搅拌）使粉末完全溶解，通常需滴加少许1N NaOH才能使溶液清亮，后补足0.1mol/L的PB于1000ml，充分混匀。
该固定剂较适于光镜免疫细胞化学研究，好是动物经灌注固定取材后，继续浸泡固定2~24h。另外，该固定剂较为温和，适于组织标本的较长期保存。
2、4%多聚甲醛-磷酸二氢钠/氢氧化钠
试剂：
A液：
| 多聚甲醛 | 40g |
| 蒸馏水 | 400ml |
B液：
| Na2HPO4•2H2O | 16.88g |
| 蒸馏水 | 300ml |
C液：
| NaOH | 3.86g |
| 蒸馏水 | 200m |
配制方法：A液好在500ml的三角烧瓶中配制（方法同前），至多聚甲醛完全溶解后冷却待用。注意，在溶解多聚甲醛时，要尽量避免吸入气体或溅入眼内。B液和C液配制好后，将B液倒入C液中，混合后再加入A液，以1n NaOH或1N HCl 将pH调至7.2~7.4，后，补充蒸馏水至1000ml充分混合，4℃冰箱保存备用。
该固定剂适于光镜和电镜免疫细胞化学研究，用于免疫电镜时，好加入少量新鲜配制的戊二醛，使其终浓度为0.5%~1%。该固定剂较温和，适于组织的长期保存。组织标本于该固定剂中，4℃冰箱保存数月仍可获得满意的染色效果。
3、Bouin's液及改良Bouin’s液
试剂：饱和苦味酸
| 40%甲醛 | 250ml |
| 冰醋酸 | 50ml |
配制方法：先将饱苦味酸过滤，加入甲醛（有沉淀者禁用），后加入冰醋酸，混合后存于4℃冰箱中备用。冰醋酸好在临用前加入。改良Bouin‘s液即不加冰醋酸。
该固定剂为组织学、病理学常用固定剂这一，对组织的穿透力较强，固定较好，结构完整。但因偏酸（pH为3~3.5），对抗原有一定损害，且组织收缩较明显，故不适于组织标本的长期保存。此外，操作时，应避免吸入或与皮肤接触。