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百萤问号-你知道免疫细胞化学中的常用固定剂怎么配制吗?(二)
6 人阅读发布时间:2024-03-18 09:14
4、Zamboni’s(Stefanini‘s)液
试剂:
配制方法:称取多聚甲醛20g,加入饱和苦wei酸150ml,加热至60℃左右,持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后,加Karasson-Schwlt‘s PB至1000ml充分混合(Karasson -Schwlt’s磷酸缓冲液的配制配制方法见后)。
该固定剂适于电镜免疫细胞化学,对超微结构的保存较纯甲醛为优,也适于光镜免疫细胞化学研究,为实验室常用固定剂之一。我们在应用中,常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和,以增加其对组织的穿透力和固定效果,保存更多的组织抗原。固定时间为6~18h。
5、PLP液
PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定剂(Periodate-Lysine-paraform-alde-hyde fixative)。
试剂:过碘酸钠
赖氨酸盐酸盐(或盐酸赖氨酸):
多聚甲醛
蒸馏水
配制方法:
(1)贮存液A(0.1mol/L赖氨酸-0.5mol/l Na3PO4,pH7.4):称取赖氨酸盐酸盐1.827g溶于50ml蒸馏水中,得0.2mol/L的赖氨酸盐酸盐溶液,然后加入Na2HPO4至0.1mol/L,将pH调至7.4,补足0.1mol/L的PB至100ml,使赖氨酸浓度也为0.1mol/L,4℃冰箱保存,好两周内使用。此溶液的渗透浓度为300mOs mmol/L/kg。
(2)贮存液B(8%多聚甲醛溶液):称8g多聚甲醛加入100ml蒸馏水中,配成8%多聚甲醛液(方法见前)。过滤后4℃冰箱保存。
(3)临用前,以3份A液与1份B液混合,再加入结晶过碘酸钠(NaIO4),使NaIO4终浓度为2%。由于AB两液混合,pH从约7.5降至6.2,故固定时不需再调pH值。固定时间为6~18h。
该固定剂较适于富含糖类的组织,对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。其机制是借助于过碘酸氧化组织中的糖类形成醛基,通过赖氨酸的双价氨基与醛基结合,从而与糖形联。由于组织抗原绝大多数都是由蛋白质和糖两部分构成,抗原决定簇位于蛋白部分,故该固定剂有选择性地使糖类固定,这样既稳定了抗原,又不影响其在组织中的位置关系。Mclean和Nakane等认为,混合是:含0.01mol/L的过碘酸盐、0.075mol/L的赖氨酸、2%的多聚甲醛及0.037mol/L的磷酸缓冲液。
6、Karnovsky's液(pH7.3)
试剂:
配制方法:先将多聚甲醛溶于0.1mol/L PB中,再加入戊二醛,后加0.1mol/L的PB至1000ml,混匀。
该固定剂适于电镜免疫细胞化学,用该固定剂在4℃短时固定,比在较低浓度的戊二醛中长时间固定能更好地保存组织的抗原性和细微结构。固定时好先灌注固定,接着浸泡固定10~30min,用缓冲液漂洗后即可树酯包埋或经蔗糖溶液后用于恒冷切片。
试剂:
多聚甲醛 | 20g |
Karasson-Schwlt’s PB | 至1000ml |
配制方法:称取多聚甲醛20g,加入饱和苦wei酸150ml,加热至60℃左右,持续搅拌使充分溶解、过滤、冷却后,加Karasson-Schwlt‘s PB至1000ml充分混合(Karasson -Schwlt’s磷酸缓冲液的配制配制方法见后)。
该固定剂适于电镜免疫细胞化学,对超微结构的保存较纯甲醛为优,也适于光镜免疫细胞化学研究,为实验室常用固定剂之一。我们在应用中,常采用2.5%的多聚甲醛和30%的饱和,以增加其对组织的穿透力和固定效果,保存更多的组织抗原。固定时间为6~18h。
5、PLP液
PLP液即过碘酸盐-赖氨酸-多聚甲醛固定剂(Periodate-Lysine-paraform-alde-hyde fixative)。
试剂:过碘酸钠
赖氨酸盐酸盐(或盐酸赖氨酸):
多聚甲醛
蒸馏水
配制方法:
(1)贮存液A(0.1mol/L赖氨酸-0.5mol/l Na3PO4,pH7.4):称取赖氨酸盐酸盐1.827g溶于50ml蒸馏水中,得0.2mol/L的赖氨酸盐酸盐溶液,然后加入Na2HPO4至0.1mol/L,将pH调至7.4,补足0.1mol/L的PB至100ml,使赖氨酸浓度也为0.1mol/L,4℃冰箱保存,好两周内使用。此溶液的渗透浓度为300mOs mmol/L/kg。
(2)贮存液B(8%多聚甲醛溶液):称8g多聚甲醛加入100ml蒸馏水中,配成8%多聚甲醛液(方法见前)。过滤后4℃冰箱保存。
(3)临用前,以3份A液与1份B液混合,再加入结晶过碘酸钠(NaIO4),使NaIO4终浓度为2%。由于AB两液混合,pH从约7.5降至6.2,故固定时不需再调pH值。固定时间为6~18h。
该固定剂较适于富含糖类的组织,对超微结构及许多抗原的抗原性保存较好。其机制是借助于过碘酸氧化组织中的糖类形成醛基,通过赖氨酸的双价氨基与醛基结合,从而与糖形联。由于组织抗原绝大多数都是由蛋白质和糖两部分构成,抗原决定簇位于蛋白部分,故该固定剂有选择性地使糖类固定,这样既稳定了抗原,又不影响其在组织中的位置关系。Mclean和Nakane等认为,混合是:含0.01mol/L的过碘酸盐、0.075mol/L的赖氨酸、2%的多聚甲醛及0.037mol/L的磷酸缓冲液。
6、Karnovsky's液(pH7.3)
试剂:
多聚甲醛 | 30g |
25%戊二醛 | 80ml |
0.1mol/L PB | 至1000ml |
配制方法:先将多聚甲醛溶于0.1mol/L PB中,再加入戊二醛,后加0.1mol/L的PB至1000ml,混匀。
该固定剂适于电镜免疫细胞化学,用该固定剂在4℃短时固定,比在较低浓度的戊二醛中长时间固定能更好地保存组织的抗原性和细微结构。固定时好先灌注固定,接着浸泡固定10~30min,用缓冲液漂洗后即可树酯包埋或经蔗糖溶液后用于恒冷切片。