N家干货 | 2025版《中国药典》生物制品相关CE更新

领域：基因细胞治疗、核酸疫苗、生物药。

背景：毛细管凝胶电泳-荧光检测法（CGE-LIF）可实现质粒超螺旋、线性、开环三种构象的分离和定量，用于对基因治疗产品中所使用的质粒DNA超螺旋形式定量。

✦美国药典<1047>基因治疗产品章节中提及可使用CE法对临床使用的质粒进行纯度检测。

✦欧洲药典9.7 “人用质粒载体” 章节建议CE法可作为定量质粒超螺旋形式的方法之一。

✦2025版《中国药典》三部增加了通则3431质粒DNA构象测定法，首次收录了该方法，可补充或替代现有琼脂糖凝胶电泳法（AGE）和HPLC法的不足，实现对产品或中间生产过程的质量控制。

图1. 质粒CE-LIF检测图谱示例

3.各论新增使用CZE法进行相关蛋白质限度检查

领域：生长激素。

背景：重组人生长激素（Somatropin, hGH）可用于治疗儿童生长障碍和成人生长激素缺乏，具有人体生长激素同等作用，电荷异构体的种类和含量是hGH产品质量控制的重要参数。

✦欧洲药典6.0（2006年）注射用生长激素章节收录了CZE法进行生长激素电荷异构体的分析。

✦2025版《中国药典》三部各论中增加了“人生长激素注射液”质量标准，收录了与欧洲药典相同的CZE方法进行相关蛋白质（欧洲药典称电荷异构体）的限度检查。

4.通则新增cIEF方法测定“单抗电荷变异体

领域：抗体药。

背景：2020年版通则3129目前仅收载了单抗电荷变异体测定法：全柱成像毛细管等电聚焦电泳法（icIEF法）。

✦美国药典（2013年）收录cIEF方法作为Trastuzumab（曲妥珠单抗）和Rituximab（利妥昔单抗）电荷异质性分析的方法。

✦2015、2020版《中国药典》的“人用重组单克隆抗体制品总论”中建议使用cIEF做单抗电荷变异体分析。

✦2025版《中国药典》三部通则3129将cIEF方法收录到 “单抗电荷变异体测定法”。2020年版通则3129目前仅收载了单抗电荷变异体测定法：全柱成像毛细管等电聚焦电泳法（icIEF法）。

此外，各论还新增阿达木、贝伐珠、英夫利西、曲妥珠、利妥昔等单抗注射液的质量标准，规定大小变异体/纯度分析需采用CE-SDS方法，等电点及电荷变异体分析需采用cIEF或icIEF法。

图2. 抗体蛋白icIEF检测图谱示例

5.各论新增cIEF法测定“人促红素注射液” 电荷变异体

领域：生物类似药。

背景：促红细胞生成素（erythropoietin, EPO）是由肾脏和肝脏分泌的一种高度糖基化的细胞因子，可促进红细胞的生成。高度糖基化和唾液酸化的EPO携带不同糖链异构体，是一种混合物，且异构体差异非常微小，难以分离定量。

✦2000版欧洲药典中EPO变异体分析收录了CZE方法。

✦2025版《中国药典》三部各论新增“人促红素注射液”，其中收录了cIEF法进行电荷变异体分析，方法速度更快，可同时获得每个变异体的精确等电点，且同一样品变异体的数目和含量与欧洲药典CZE方法结果一致。

6.总论新增使用CE-SDS、cIEF、CZE法对“人用抗体偶联药物制品”质量控制

领域：人用抗体偶联药物（ADC）。

背景：ADC由抗体和小分子细胞毒药物通过连接子偶联而成的治疗用药物。

✦2025版《中国药典》三部总论新增ADC，重点阐述抗体偶联药物和其组成部分的通用性技术要求（其他偶联药物如抗体偶联核素药物(ARC)、多肽偶联药物（PDC）、抗体寡核苷酸偶联药物（AOC）等也可参考该总论）。

总论建议使用CE-SDS分析大小变异体，建议使用CZE、cIEF分析电荷变异体。

图3. ADC样品nr CE-SDS检测图谱示例

图4. ADC样品CZE检测图谱示例

图5. ADC样品icIEF检测图谱示例

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