文摘:

在这里，我们提出了一个H+偶联人类肽转运体PepT1的功能表征方案，并充分注意将该方案转移到Na+偶联糖转运体SGLT1、有机阳离子转运体OCT2、Na+/Ca2+交换剂NCX和神经元谷氨酸转运体EAAT3。

该检测方法是为市售SURFE2R N1仪器(Nanion Technologies GmbH)开发的，该仪器应用固体支撑膜(SSM)为基础的电生理学。该技术被广泛应用于膜转运体的功能表征，目前已有100多种不同的转运体被表征。该技术具有成本效益，易于使用，并能够进行高通量测量。

基于ssm的电生理学利用ssm包覆的金传感器物理吸附含有感兴趣蛋白质的膜泡。快速溶液交换提供底物并激活传输。为了测量PepT1的活性，我们采用肽浓度跳变来激活H+/肽symport。质子流入给传感器充电。测量了反映PepT1转运活性的电容电流。在同一个传感器上进行多次测量，可以比较不同条件下的运输活动。在这里，我们测定了pept1介导的甘草酸转运的EC50，并使用特定的肽抑制剂Lys[Z(NO2)]-Val进行抑制实验。